研伴實(shí)業(yè)植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過酸性磷酸酶反應(yīng)系統(tǒng)中對(duì)硝基酚磷酸水解后產(chǎn)物峰值的變化，即采用比色法來測(cè)定植物組織裂解懸液樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種植物組織，包括種子、球莖（bulb）、塊莖（tuber）、根（root）、種葉（coleoptile）和葉片裂解懸液樣品或純化以及粗提的酶蛋白酸性磷酸酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

酸性磷酸酶（acid phosphatase；ACP；EC 3.1.3.2），是一種酸性水解酶（acid hydrolase）和去磷酸化酶，即磷酸單酯酶（phosphomonoesterase），在酸性環(huán)境下，水解磷酸單酯化合物而釋放出無機(jī)磷。酸性磷酸酶活性與細(xì)胞生長、能量代謝、代謝調(diào)節(jié)、信號(hào)通道等功能有關(guān)。在動(dòng)物體內(nèi)和植物中普遍存在。植物酸性磷酸酶是植物和土壤中普遍存在的水解酶，其活性高低與植物和土壤中的磷素水平密切相關(guān)。間接影響植物光合成、呼吸和生長等。植物酸性磷酸酶在種子、球莖（bulb）、塊莖（tuber）、根（root）、種葉（coleoptile）和葉片組織中高度表達(dá)?；趯?duì)硝基酚磷酸（p-nitrophenyl phosphate）在酸性磷酸酶的催化下，產(chǎn)生磷酸（phosphate）和生色產(chǎn)物對(duì)硝基*（p-nitrophenol），在分光光度儀下，其吸光值的變化（410nm 波長），來定量測(cè)定酸性磷酸酶的總活性。酸性磷酸酶反應(yīng)系統(tǒng)為：

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（ReagentA） 毫升

裂解液（Reagent B） 毫升

緩沖液（Reagent C） 毫升

底物液（Reagent D） 毫升

終止液（Reagent E） 毫升

陰性液（Reagent F） 微升

產(chǎn)品說明書 1 份

保存方式

保存底物液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；底物液（Reagent D）避免光照；終止液（Reagent E）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證 6 月

用戶自備

15 毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

1.5 毫升離心管：用于樣品保存的容器

DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織樣品恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)物孵育的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備

比色皿或酶標(biāo)板：用于比色的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 樣品準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好新鮮的植物組織，并秤重以確定組織重量 200 毫克

1． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

2． （選擇步驟）加入 xx 毫升 清理液（Reagent A ）清洗 1 次

3． 移入到一個(gè)液氮凍存管

4． 即刻放進(jìn)液氮罐過夜

5． 次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意： 切莫使組織凍融 ）

6． 放進(jìn)一個(gè) 15 毫升錐形離心管

7． 加入預(yù)冷的 xx 微升 裂解液（Reagent B ）

8． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻

9． 即刻放入預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器

10．在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）

11．將所有組織勻漿物移入 1.5 毫升離心管

12．放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

13．小心移取 500 微升上清液到新的預(yù)冷的 1.5 毫升離心管

14．移取 10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意： 建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－ GMS30030.1）

15．即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

二、 測(cè)定準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好上述待測(cè)樣品，置于冰槽里

2． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為 37℃）：波長 410nm，并置零

3． 緩沖液（Reagent C ）室溫下均衡溫度

三、 背景對(duì)照測(cè)定

1． 移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到新的比色皿

2． 加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

3． 加入 xx 微升 陰性液（Reagent F ）

4． 上下傾倒數(shù)次，混勻

5． 放進(jìn) 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

6． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E） ），混勻

7． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，此為背景空對(duì)照讀數(shù)

四、 樣品活性測(cè)定

1． 移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到新的比色皿2． 加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

3． 加入 20 微升待測(cè)樣品（總量 50 微克蛋白）

4． 上下傾倒數(shù)次，混勻

5． 放進(jìn) 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

6． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E） ），混勻

7． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，此為樣品讀數(shù)

五、 計(jì)算樣品活性

六、 酶標(biāo)板測(cè)定

1． 在 96 孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記：背景對(duì)照和待測(cè)樣品

2． 分別移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到所有孔中

3． 分別加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

4． 分別加入 xx 微升 陰性液（Reagent F ）或待測(cè)樣品（20 微克蛋白）到相應(yīng)孔中

5． 輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板

6． 放進(jìn) 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

7． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E ）

8． 輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板

9． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè)

10．活性計(jì)算

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為 20 次（比色皿）和 80 次（酶標(biāo)板）操作，包括背景對(duì)照

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 終止液（Reagent E ）具有腐蝕性，注意操作安全

4． 系統(tǒng)操作過程中，背景測(cè)定只需 1 次

5． 樣品須澄清，至關(guān)重要

6． 避免使用氟化物（fluoride）、酒石酸（tartrate）、草酸鹽（oxalate）、氯苯丁酯（clofibrate）等處理樣品

7． 比色測(cè)定后，比色皿須清洗*

8． 樣本測(cè)定讀數(shù)升高表明具有酶活性

9． 建議待測(cè)樣本蛋白濃度為50微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1）

10．如果待測(cè)樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度

11．酸性磷酸酶單位活性定義為：在 37℃，pH 5.0 條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放 1 微摩爾對(duì)硝基*所需的酶量作為一個(gè)活性單位

12．本公司提供系列酸性磷酸酶類檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感使用承諾

秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司通知，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHATYOU DID WRONG 。

訂購信息

單組分訂購信息

編號(hào) 名稱 規(guī)格

GMS50049.4 植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20/80 次

GMS50049.4A 清理液（ReagentA） 毫升

GMS50049.4B 裂解液（Reagent B） 毫升

GMS50049.4C 緩沖液（Reagent C） 毫升

GMS50049.4D 底物液（Reagent D） 毫升

GMS50049.4E 終止液（Reagent E） 毫升

GMS50049.4F 陰性液（Reagent F） 毫升