人甲殼質酶蛋白 40（YKL-40）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織

勻漿及相關液體樣本中甲殼質酶蛋白 40（YKL-40）的含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甲殼質酶蛋白 40（YKL-40）水平。用純化的

人甲殼質酶蛋白 40（YKL-40）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次

加入人甲殼質酶蛋白 40（YKL-40），再與 HRP 標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗

體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的

作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人甲殼質酶蛋白 40（YKL-40）呈正相關。

用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人甲殼質酶蛋白 40

（YKL-40）含量。

試劑盒組成：

試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存

說明書 1 份 1 份

封板膜 2 片 2 片

密封袋 1 個 1 個

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品 0.3ml×6 管 0.3ml×6 管 2-8℃保存

酶標試劑 5 ml×1 瓶 10 ml×1 瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

終止液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

20×濃縮洗滌液 15ml×1 瓶 25ml×1 瓶 2-8℃保存

注：標準品濃度依次為：64、32、16、8、4、0 ng/mL.

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集

上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心

20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次

離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程

中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉2

/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞

濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分

鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?

用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將

標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢

測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上

進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。