武漢艾美捷科技
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閱讀：1045發(fā)布時間：2016-12-5
免疫沉淀和免疫共沉淀
免疫沉淀
免疫沉淀（IP）是用來純化和檢測抗原時應(yīng)用zui廣泛的方法之一。免疫沉淀的基本原理非常簡單。針對特異靶抗原的抗體（單克隆或多克隆抗體）可在細胞裂解液等樣品中與靶抗原形成免疫復合體。之后免疫復合體通過固相化的抗體結(jié)合蛋白例如蛋白A 或蛋白G 被捕獲至固相支持物上（例如瓊脂糖珠）。
從溶液中捕獲這個復合體的過程被稱為沉淀。任何不被抗體沉淀的蛋白都被洗滌掉。zui終，結(jié)合的免疫復合體（包括抗原和抗體）成分被從支持物上洗脫下來，通過SDS–PAGE（凝膠電泳）進行分析，通常可結(jié)合Western blot檢測來確認抗原身份。
免疫共沉淀
免疫共沉淀是免疫沉淀的延伸，其基于潛在的免疫沉淀反應(yīng)來捕獲并純化靶分子，不僅包含初級靶分子（例如抗原），還可結(jié)合在樣品溶液中通過天然相互作用與靶分子結(jié)合的任何其他大分子。因此，實驗被稱為免疫沉淀或是免疫共沉淀只取決于檢測焦點是初級靶分子（抗原）還是次級靶分子（相互作用蛋白）。
優(yōu)化免疫沉淀和免疫共沉淀實驗
傳統(tǒng)的免疫沉淀/ 免疫共沉淀操作過程會包含一些由于實驗基本形式、抗體和相關(guān)化學試劑造成的缺陷。其中zui常見的問題是凝膠分析中抗體條帶產(chǎn)生的干擾。在傳統(tǒng)免疫沉淀過程中，抗體會被一同洗脫下來，導致在還原型SDS–PAGE 分析時產(chǎn)生重鏈和輕鏈條帶（分別為50 和25kDa），這些會妨礙具有相似大小的IP 或CO–IP 產(chǎn)物的檢測。對傳統(tǒng)免疫沉淀過程的一些改進可以解決這樣或那樣的*局限。使用微型離心機旋杯或離心柱可以確保在使用小體積瓊脂糖珠或其他親和樹脂時更有效地進行洗脫步驟和回收。通過將抗體進行共價固相化可以在洗脫抗原或共沉淀產(chǎn)物的同時不會將抗體片段一同洗脫下來。
有很多的網(wǎng)友是咨詢?nèi)绾蜗劓湼蓴_問題，很多時候在實驗的操作過程中通常會用到相同的一抗或同種屬來源的一抗，這種情況下，WB實驗中IP抗體變性后產(chǎn)生的重鏈和輕鏈都能夠被二抗識別， 而此非特異的信號往往會部分甚至*掩蓋目的蛋白的信號。Abbkine公司開發(fā)的IPkine特異性抗體二抗產(chǎn)品，可以避免IP抗體變性后重鏈造成的干擾；武漢愛美捷科技有限公司的IPkine特異性抗體產(chǎn)品可以將Protein A/G引起的這種干擾降到zui低?？偠灾褂肐Pkine特異性抗體可以獲得zui干凈的IP/co-IP實驗結(jié)果。
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