周青，錢美圓，仇文軍，徐波
應(yīng)用技術(shù)研究中心
準(zhǔn)備好樣品，設(shè)定好分離方法，選好色譜柱，確認(rèn)檢測波長，OK！開始制備純化吧~實(shí)驗(yàn)員小周熟練地開始了一個新樣品的制備純化工作，一切看起來按部就班，盡在掌握。等等，這個峰信號似乎有點(diǎn)偏弱?。吭趺椿厥?？蛋白質(zhì)的zui大吸收波長不都是在280nm么？
小周滿臉疑惑地跑去請教實(shí)驗(yàn)室大咖老徐。老徐看了看小周的分離方法，又問了一些關(guān)于蛋白樣品的信息，慢悠悠地說：“蛋白質(zhì)的檢測波長一般是280nm沒錯，但前提是蛋白質(zhì)系列中有較多帶有芳香環(huán)類的氨基酸殘基，你這個蛋白樣品系列未知，zui大吸收波長就不一定是280nm，你掃過紫外光譜沒有？”小周搖搖頭，表示實(shí)驗(yàn)室的紫外分光光度計壞了，暫時用不了。“這樣啊，別著急，傳授你一個新招兒，看好了，”老徐麻利地在iPad上點(diǎn)了幾下，讓小周再進(jìn)一針樣品，小周不明覺厲地照做了，“好了，樣品的zui大吸收波長找到了，是210nm左右，你下次就以210nm作為檢測波長再嘗試制備吧，”老徐留下幾句話就飄走了。接下來，小周的實(shí)驗(yàn)就順利多了，他很快就拿到了目標(biāo)產(chǎn)物，又開始了后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
雖然只是實(shí)驗(yàn)室的一個小插曲，但這個故事告訴我們：三泰科技又憋出新招了——全波段掃描功能。這個功能非常實(shí)用，一個常見的應(yīng)用場景就是未知吸收波長的化合物的制備純化，有了全波段掃描功能的助力，我們就無需事先利用分光光度計對樣品進(jìn)行掃描，直接在SepaBeanTM machine系統(tǒng)里進(jìn)行上樣純化，在分離過程中通過實(shí)時監(jiān)控洗脫峰的全波段掃描圖譜，及時修正儀器的檢測波長，從而地完成分離純化任務(wù)。
上述蛋白純化案例的具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)如表1所示：
表1. 蛋白樣品的分離純化實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置
修正檢測波長前及修正后的蛋白樣品分離圖譜如圖1和圖2所示：
圖1. 檢測波長280nm下的蛋白樣品分離圖譜。
圖2. 檢測波長215nm下的蛋白樣品分離圖譜。
全波段掃描功能的應(yīng)用范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止于上述情形，例如，在分離純化這樣的一組混合物樣品時，混合物里每個組分的zui大吸收波長都不相同，對于事先確定的檢測波長來說就顯得不太適用，此時我們就可以通過實(shí)時監(jiān)控洗脫峰的全波段掃描圖譜并及時修正檢測波長，實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)峰收集。后續(xù)我們實(shí)驗(yàn)室會推出更多此類案例的應(yīng)用文章，敬請期待和保持關(guān)注！
文中所用蛋白純化柱訂購信息如下表所示：
表2. SepaFlash® HP Bio C18系列反相柱參數(shù)
（填料:High efficiency spherical C18, 20-45μm, 300Å）
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