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閱讀：307發(fā)布時間：2024-11-27
密度梯度離心法、速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法怎么理解？
密度梯度離心法可分為速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法。
一、密度梯度離心法(又稱區(qū)帶離心法)
原理：不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時，在一定離心力作用下，在一定惰性梯度介質(zhì)中，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。
密度梯度離心法的優(yōu)點是：具有很好的分辨率，分離效果好，可一次獲得較純顆粒；
適用范圍廣，既能分離沉淀系數(shù)差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒；
顆粒不會積壓變形，能保持顆粒活性，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。
密度梯度離心法的缺點：
離心時間較長；
需要制備梯度液；
操作嚴(yán)格，不宜掌握。
二、速率區(qū)帶離心法
原理：分離的粒子在離心力作用下，在梯度液中沉降速度的不同，離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)形成幾條分開的樣品區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的目的。
臨床上單核細(xì)胞分離常使用這個方法。使用的分離液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把靜脈血中單個核細(xì)胞分離出來，前一種分離液將血液中單個核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）分為一個層，同時提出。而Percoll分離液將血中淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分為二個梯度層，分別提取。后者分離效果優(yōu)于前者，但操作繁瑣。
三、等密度區(qū)帶離心法
原理：不同顆粒存在浮力密度差，在離心力場下，顆?；蛳蛳鲁两担蛳蛏细∑?，一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上（即等密度點）形成區(qū)帶。
等密度區(qū)帶離心的有效分離取決于顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒的大小和形狀無關(guān)，但后兩者決定著達(dá)到平衡的速率、時間和區(qū)帶的寬度。
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