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產(chǎn)品介紹：

BCA Protein Assay Kit

描述：BCA 蛋白質(zhì)定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根 據(jù)目前世界上常用的蛋白濃度檢測方法之一－BCA （bicinchoninic acid）法改良研制而成，該試劑盒具有蛋白 濃度測定的簡單性，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。本試 劑盒的原理是蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)在堿性環(huán)境下能與 Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，將 Cu2+還原成 Cu+，而 BCA 試劑可 敏感特異地與 Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物，并在 562nm 處有最大光吸收值，該復(fù)合物顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度 成正比，可根據(jù)吸收值的大小來測定蛋白的含量，1 小時內(nèi) 即可完成蛋白定量檢測。本試劑盒含有牛血清白蛋白（BSA） 溶液作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定范圍為 25～2000 μg/ml。該 試劑盒可用于 20 次試管檢測或 200 次 ELISA 板檢測。

操作方法
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：按下表將 BSA 進(jìn)行稀釋。
管號 PBS
BSA 體積
（來源）
BSA 終濃度
（μg/ml）
A 0 300 μl (母液) 2000
B 125 μl 375 μl (母液) 1500
C 325 μl 325 μl (母液) 1000
D 175 μl 175 μl (B 管) 750
E 325 μl 325 μl (C 管) 500
F 325 μl 325 μl (E 管) 250
G 325 μl 325 μl (F 管) 125
H 400 μl 100 μl (G 管) 25
I 400 μl 0 0
2. BCA 工作液的配置：根據(jù)樣品數(shù)量及測定方法，將 BCA Reagent A 和 BCA Reagent B 按體積比 50:1充分混勻即可。
注意：配制 BCA 工作液前請將 BCA Reagent A 混勻。
3. 標(biāo)準(zhǔn)比色杯測定方法
(1)吸取 0.1 ml 的各標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品置于合適的管中。
(2)加入 2 ml BCA 工作液，充分混勻。
(3)37℃孵育 30 min，然后室溫靜置 10 min。
(4)紫外分光光度計于 562 nm 處檢測吸光度。
(5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(6)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。
4. 微管測定方法
(1)分別取 25 μl 新鮮配制的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)液和待測樣品，加入到 ELISA 反應(yīng)板中。
(2)每孔加入 200 μl BCA 工作液，充分混勻。
(3)37℃孵育 30 min，然后室溫靜置 10 min。
(4)酶標(biāo)儀于 562nm 處檢測吸光度。
(5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(6)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。
注意事項
1. 待測樣品濃度在 25~2000 μg/ml 的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
2. BCA 工作液配制后 24 小時內(nèi)使用效果穩(wěn)定。
3. BCA 法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。
4. 使用普通的分光光度計測定時，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量，使其不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例調(diào)整。
5. 適用范圍

實例操作 按上述操作方法可得到如下標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，該線性方程經(jīng)過 多次繪制，系數(shù)均為 0.0001，且 R 2 值均在 0.99~1 之間， 重復(fù)性好，在計算蛋白濃度時可直接用該標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行 計算。例如：在 562 nm 處檢測吸光值為 0.1，則此時 y 值 為 0.1，代入方程 y=0.0001x 中，可得蛋白濃度為 1000 μg/ml。

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