豬水皰性口炎(VSV)熒光PCR法【儲存條件及有效期】

1．避光-20℃儲存，有效期 12 個月。

2．低溫運輸不能超過 4 天；開封后避光-20℃儲存，對有效期沒有影響。避免反復(fù)凍融，凍融 6 次不影響檢測效果。

3．生產(chǎn)日期、有效期至：見外包裝盒。

【適用儀器】

適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動熒光PCR 檢測儀。

【樣本要求】

1．樣本種類：鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液；培養(yǎng)物等樣品。

2．保存條件：采集的標(biāo)本應(yīng)及時送檢，24 小時內(nèi)檢測的應(yīng) 4℃保存，超過 24 小時的最好-70℃保存，并避免反復(fù)凍融。

【檢測方法】

1 ． 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

將試劑盒各組分置 4℃避光融化，充分混勻后瞬間離心。計算試劑使用份數(shù) N（N=樣本數(shù)+1 管陽性對照+1 管陰性對照），根據(jù)下表配置反應(yīng)體系mix，加入一適當(dāng)體積離心管中，充分混勻后瞬間離心，按 20μL 分裝至 PCR 反應(yīng)管/板，并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

【結(jié)果分析條件設(shè)定】：

u 基線（Baseline）設(shè)定：應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán)，建議基線設(shè)為6~15。

u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】：

1.   陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性，無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct；

2.   陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性，有明顯的指數(shù)擴增期，Ct值應(yīng)小于等于35；

3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。

【結(jié)果判斷】：

1.   陽性：有明顯的指數(shù)擴增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明顯的指數(shù)擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復(fù)核一次，若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；

3.   陰性：無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。

【注意事項】：

             1．PCR 操作各階段應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，避免交叉污染。

             2．試劑盒各組分使用前應(yīng)充分融化混勻，離心數(shù)秒后使用。

             3．各組分不得與其他產(chǎn)品或不同批號的相應(yīng)成分進行互換。

             4．待測標(biāo)本若不及時檢測，應(yīng)保存于-20℃或-70℃。

             5．樣品的處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操作。

             6．PCR 操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗和受過專業(yè)培訓(xùn)。

             7．本試劑盒僅用于科研使用，不做為臨床診斷使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：