膜蛋白的純化

一 旦 使 用 了 合 適 的 去 污 劑 將 膜 蛋 白 從 細(xì) 胞 膜 中 増 溶 出 來(lái) ，就 可 以 分 離 目 標(biāo) 蛋 白 質(zhì) 了 。傳 統(tǒng) 色 譜 層 析 技 術(shù) ，如 凝 膠 過(guò) 濾 、親 和 、離 子 交 換 和 層 析 聚 焦 等 都 可以 用 于 膜 蛋 白 純 化 。然 而 ，在 去 污 劑 存 在 條 件 下 使 用 色 譜 層 析 需 要 注 意 以 下 幾 點(diǎn) 。

1. 使用足量的去污劑，以維持整合膜蛋白在緩沖液中處于可溶形式并防止蛋白質(zhì)聚集。

2. 由于大多數(shù)去污劑具有疏水性，基于蛋白質(zhì)疏水性的蛋白質(zhì)分離方法，如苯基-瓊脂糖凝膠和反相層析也許不適于膜蛋白的純化。

3.elisa定量試劑盒膜蛋白與去污劑膠束的結(jié)合，特別是具有大膠束尺寸或本身為離子型的去污劑，會(huì)遮蔽膜蛋白的電荷。因此，離子交換層析分離膜蛋白的能力也許不如非膜蛋白。

4.增溶膜蛋白的離子型去污劑，如膽酸鹽或脫氧膽酸鹽，不適用于離子交換層析。非離子型或兼性去污劑則可用于基于電荷的制備技術(shù), 包括離子交換層析和制備電泳。

5. 含糖基的去污劑也許會(huì)干擾特定的凝集素層析，如 辛 基 葡 糖 苷 會(huì) 干 擾 ConA層 析 。

6.由于溶解的膜蛋白處于去污劑膠束中，在凝膠過(guò)濾中膜蛋白具有更大的表觀分子質(zhì)量。能形成大分子質(zhì)量膠束的去污劑，如 Trtion X-100, 會(huì)使溶解的膜蛋白的分子質(zhì)量 增 加 60?100 kDa。因此, 大多數(shù)蛋白質(zhì)會(huì)出現(xiàn)在高分子質(zhì)量部分，從而使基于分子大小的蛋白質(zhì)分離變得困難。