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做免疫組化時(shí),一般都會(huì)封閉。以減少假陽性。
封閉主要是用于封去切片上一些非特異性吸附。用一種非特異性的蛋白,把那些容易吸附蛋白的空間和位點(diǎn)占起來,這樣,加上抗體時(shí),抗體只能與對(duì)應(yīng)的抗原去結(jié)合了。
一般封閉可以用5%的BSA,這個(gè)價(jià)格便宜,而且效果還行。但理論上,用與二抗同來源的正常血清會(huì)更好。
比如,一抗為國產(chǎn)的兔抗IL-2,二抗用標(biāo)記的羊抗兔IgG。那么,封閉血清就選擇與二抗同來源的正常羊血清(一般為山羊)。而同理,如果一抗為羊抗IL-2,二抗可以選標(biāo)記的兔抗羊IgG,封閉血清選擇正常兔血清。
使用時(shí),可以用PBS將正常血清稀釋20倍,直接滴加在切片上,37℃度10-30分鐘,直接甩掉,不洗,輕輕的吸一下旁邊的液體,再加一抗。聽說4℃過夜比起37℃兩小時(shí)背景會(huì)干凈一些。當(dāng)然,時(shí)間也會(huì)長一些。
關(guān)于抗體質(zhì)量,也許種類太多,我們要努力的路還很長。
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