大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit試劑配制:

1、大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit說明書酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。

2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

注意事項：

1加樣：

①大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit說明書實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；

②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；

③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。

2.溫育：

①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；

②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水??；

3.洗板：

①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；

②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；

③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；

4.顯色：

ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。

5.判定：

讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果，酶標儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。