PCR產物中去引物二聚體技術

時間：2020/1/3閱讀：666

去PCR產物中引物二聚體的方法，包括：1)采用超濾離心法對PCR產物進行純化；2)使用磁珠法對1)中獲得的產物進行純化，以進一步去引物二聚體；其中，所述PCR產物和引物二聚體的大小差值為20bp～170bp。
目前，在高通量測序的文庫構建時通常采取磁珠法(例如，CN107236726A和CN106701737A)，其原理為：加入不同體積比例的磁珠試劑會吸附不同片段大小的DNA，當加入磁珠體積越少時，吸附的大片段越多。因此，當PCR產物片段與引物二聚體大小相差較大(例如180bp)時，磁珠法在去除蛋白質、鹽離子等雜質的同時也能夠去除引物二聚體；而當PCR產物與引物二聚體大小相差不大時，磁珠法雖然仍能夠去除雜質，但卻無法將PCR產物和引物二聚體很好地區(qū)分開來，因而純化效果不佳。有鑒于此，在本領域中存在對大小差距不大的PCR產物與引物二聚體進行有效分離的強烈需求。
PCR擴增過程中往往會產生引物二聚體，而這些引物二聚體導致非特異性擴增，且會參與到文庫構建以及后續(xù)的測序中。在測序時，過多的引物二聚體會占用測序通量，從而增加測序成本，因此在PCR擴增后去除引物二聚體是非常必要的。目前去除引物二聚體的方法主要采用的是磁珠法、割膠回收等方法。

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