聚合酶鏈式反應（PCR）標準的三步驟詳述

時間：2024/9/2閱讀：832

PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。

標準的PCR過程分為三步：

第一步，DNA變性（90℃-96℃）雙鏈DNA在高溫作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應做準備；

第二步，退火（60℃-65℃）溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。

模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；

第三步，延伸（70℃-75℃）在Taq酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′到3′端的方向延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

DNA模板--引物結合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。

重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

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