免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或*從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Agar LEVINE-EMB eosine-methylene blue-lactose agar acc.to LEVINE,人星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA1-氟-2-(易制爆)CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse  膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗原

列文EMB 瓊脂/伊紅亞甲藍(lán)乳糖瓊脂人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA1-氟-2-(易制爆)CD5  CD5 多肽抗原

Listeria enrichme broth acc.to FDA 李斯特氏菌富集肉湯人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA3-磺基十四烷基二甲基銨ICAM-2/CD102(iercellular adhesion molecules-2)  細(xì)胞間粘附分子-2抗原

Buffered Listeria Enrichme Broth base acc.to FDA/BAM1955人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA3-磺基十四烷基二甲基銨CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1)  神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗原

緩沖李斯特氏菌富集肉湯基礎(chǔ)人小膠質(zhì)細(xì)胞cDNA四癸基溴化銨CD62L (ELAM-1/L-Selectin )  L選擇素抗原

Listeria enrichme broth( base)FDA/IDF-FIL人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNA甲次硫酸 水合物E-Selectin  E選擇素抗原

李斯特氏菌富集肉湯（基礎(chǔ)）人真皮血管平滑肌細(xì)胞cDNA雙(六氟乙基酮)合鎳(II)，水合CD80/B7-1(human)  人刺激分子B7-1蛋白抗原

Listeria selective enrichme suppleme acc.to FDA-BAM 1992人表皮角質(zhì)細(xì)胞cDNA3-氟-4-甲氧基酸CD80/B7-1  刺激分子B7-1蛋白抗原

IL-2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2IgG腦多巴胺神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Amoxicillin SodiumRat TIE-2 (Tyrosine Kinase With Immunoglobulin-Like And EGF-Like Domains 2) 檢測(cè)試劑盒

IL-2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2(人) IgG鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關(guān)蛋白2-(4-溴基)咪唑并[1,2-a]吡啶Rat U-T4 (Ultrasensitivity Thyroxine) 檢測(cè)試劑盒

ITK/PSCTK2/FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠IL-2誘導(dǎo)型T細(xì)胞激酶IgG膽囊收縮素A受體2-(4-溴基)咪唑并[1,2-a]吡啶Rat U-T3 (Ultrasensitivity Triiodothyronine) 檢測(cè)試劑盒

IL-2R Gamma/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2受體γ鏈IgG小腦肽34-溴甲砜Rat NFE2L2 (Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like Protein 2) 檢測(cè)試劑盒  

CD122/IL-2RB/FITC  熒光素標(biāo)記CD122/白介素2受體β鏈IgG周期素依賴性激酶樣54-溴甲砜Rat PLAU/uPA(Urokinase-Type Plasminogen Activator) 檢測(cè)試劑盒

IL-3/FITC (mouse, rat)  熒光素標(biāo)記白介素3IgGα1-chimaerin蛋白4-溴甲砜Rat PLAUR/uPAR (Plasminogen Activator, Urokinase Receptor) 檢測(cè)試劑盒

IL-3R Alpha/CD123/FITC  熒光素標(biāo)記白介素3受體a鏈IgG信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白9復(fù)合體7b2,2′-聯(lián)嘧啶Rat VEGF-B (Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) 檢測(cè)試劑盒

IKI3 family protein/FITC  熒光素標(biāo)記擬南芥IKI3IgG鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶調(diào)節(jié)蛋白1（唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1）2,2′-聯(lián)嘧啶Rat VEGF-C (Vascular Endothelial Cell Growth Factor C) 檢測(cè)試劑盒
9號(hào)染色體開放閱讀框163抗體淡紅擬口蘑Mouse TEK (Tyrosine Kinase, Endothial)  Kit  

白布勒擔(dān)孢酵母Mouse TE (omerase)  Kit

芽胞桿屬M(fèi)ouse C (Tenascin C)  Kit  

嗜酸乳桿Mouse X (Tenascin X)  Kit

彩色豆馬勃Mouse TDG1 (Teratocarcinoma Derived Growth Factor 1)  Kit  

游動(dòng)球Mouse TCC C5b-9 (Terminal Compleme Complex C5b-9)  Kit

小粒凱斯特亞Mouse TIEG1 (TGF-beta-inducible early response gene-1)  Kit

Patulibacter americanusMouse TBP2 (Thioredoxin Binding Protein 2)  Kit