人Dickkopf 1ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；ZR-75-30

人急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞；I 2.1(CRL-2572)

人膀胱癌細(xì)胞；5637（HTB-9）

人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞；786-O [786-0]

人腎透明細(xì)胞癌；Caki-1

人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1

人食管癌細(xì)胞；EC109

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT-15 [HCT15]

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LS 174T [LS174T]

人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-468

人肺支氣管癌細(xì)胞；NCI-H1650

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H2087

人小細(xì)胞肺癌；NCI-H2227

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞；NCI-H295R

小鼠源細(xì)胞

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swiss albino

小鼠T淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；Cyc-Tag(S49)

小鼠骨髓細(xì)胞；FDC-P1

小鼠垂體瘤細(xì)胞；GT1-1

小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞；MC3T3-E1

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3

小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞；P19

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3)；PA12

小鼠血細(xì)胞；WEHI-3 [WEHI3]

小鼠成纖維細(xì)胞；φ2

小鼠紅白血病細(xì)胞；MEL

小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Sp2/0-Ag14