雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒實驗原理
 

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的雞γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ)，再與HRP標記的雞γ干擾素(IFN-γ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞γ干擾素(IFN-γ)濃度。

標本要求

    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

   2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

60pg/ml

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

30pg/ml

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

15pg/ml

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

7.5pg/ml

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒操作總程序：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有
析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行試驗。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月