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測(cè)定意義

硝酸還原酶（NiR）是一類(lèi)能催化亞硝酸鹽還原的酶，廣泛存在于微生物及植物體內(nèi)，是自然界氮循環(huán)過(guò)程中的關(guān)鍵酶，可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3，從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累，降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。

測(cè)定原理

亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。

需自備的儀器和用品

天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體Human MAML3 ELISA Kit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子（vWF）ELISA試劑盒,

化芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移抗體Human MAN2B2 ELISA Kit小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物（PAP）ELISA試劑盒,

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human MAN1A2 ELISA Kit抗糖蛋白抗體（GP）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體Human MANBAL ELISA Kit百日咳素（PT）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體Human MANSC1 ELISA Kit血吸蟲(chóng)（schistosoma）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體Human MANEA ELISA Kit輪狀病抗原（RV Ag）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

激活素受體相互作用蛋白1抗體Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit鈣調(diào)素（CAM）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

固酮類(lèi)還原家族7成員A2抗體Human MAP4K2 ELISA Kit小鼠P選擇素（P-Selectin/CD62P）ELISA試劑盒,

亞硝酸還原酶(NiR)微量法檢測(cè)試劑盒三吡咯烷溴化鏻六氟鹽 98%小鼠性β葡萄糖苷(GBA)免疫試劑盒淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體Thy-1/CD90/ Thy1.1  CD90抗體

2-溴-1,3,5-三異 96.0 %小鼠絲裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)免疫試劑盒淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體THSD1  血小板跨膜反應(yīng)蛋白1抗體

6-并三氮唑-1,1,3,3-四脲六氟酯 98% 小鼠絲氨轉(zhuǎn)肽抑制劑Kazal type 3(SPINK3)免疫試劑盒轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體THRSP  狀反應(yīng)蛋白抗體

2--1,3-二咪唑鎓四氟鹽 98%小鼠水通道蛋白9(AQP-9)免疫試劑盒卵巢、胎盤(pán)、前列腺、蛋白22抗體Thrombospondin 2  血小板反應(yīng)蛋白2/敏感蛋白2抗體

6--1-羥并三氮唑 98%小鼠水通道蛋白5(AQP-5)免疫試劑盒錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體Thrombomodulin/CD141  血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體

1-(-1-吡咯烷亞)吡咯烷六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白4(AQP-4)免疫試劑盒載脂蛋白C3抗體thrombin II  Ⅱ(II)抗體

2--1,3-二化咪唑鎓 90%小鼠水通道蛋白3(AQP-3)免疫試劑盒凋亡增強(qiáng)核抗體Thrap3/TRAP150  狀受體相關(guān)蛋白3抗體

代二哌碳鎓六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白2(AQP-2)免疫試劑盒染色體脆弱性相關(guān)因抗體THRA1+2  狀受體α1+α2抗體

代三吡咯烷鏻六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白1(AQP-1)免疫試劑盒化蛋白激B抗體THRA1  狀受體α1抗體

多肽試劑TCTU 98%小鼠水通道蛋白0(AQP-0)免疫試劑盒銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體THOC2  轉(zhuǎn)錄因子THOC2抗體

2--1,3-二咪唑六氟鹽 98%小鼠雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒酰輔A合成家族4抗體Thioster-containing protein 1  按蚊硫酯包含蛋白-1抗體

3-(二乙氧酰氧)-1,2,3-并三-4-酮 98% 小鼠瘦素(LEP)免疫試劑盒性樣蛋白2抗體Thioredoxin 2  線粒體硫氧還蛋白2抗體

代二乙酯 純度 ≥90%小鼠嗜性粒陽(yáng)離子蛋白(ECP)免疫試劑盒AHNAK核蛋白2抗體Thioredoxin  硫氧還蛋白抗體

2-(2-吡酮-1-)-1,1,3,3-四脲四氟鹽  99%小鼠嗜性粒過(guò)氧化物(EPO)免疫試劑盒二腺苷核糖化因子6相互作用蛋白抗體THAP1  核凋亡因子THAP1抗體

N,N'-二環(huán)己碳二亞 99.0%小鼠嗜粒趨化因子(ECF)免疫試劑盒p53誘導(dǎo)蛋白5抗體TH/T-H glycoprotein  TH糖蛋白抗體

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。