1.ATCC細(xì)胞玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時(shí)以上;
2.無菌工作臺(tái)先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時(shí)以上;
3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗(yàn):將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;
4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,ATCC細(xì)胞分裝成支置-20度保存;
5.培養(yǎng)箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應(yīng)照射1小時(shí)以上,如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來菌).至少每月一次.
6.進(jìn)入操作時(shí)應(yīng)注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時(shí)注意無菌臺(tái)內(nèi)空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數(shù)量較多,培養(yǎng)瓶應(yīng)放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離,開瓶(蓋)時(shí)應(yīng)先用75%酒精反復(fù)擦拭或用燈燒,開開后應(yīng)用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.ATCC細(xì)胞整個(gè)操作過程盡量在無菌臺(tái)靠里面一點(diǎn).