由于大多數(shù)原代細(xì)胞適宜的pH為7.0~7.4，偏離此范圍可能對細(xì)胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般對pH變動(dòng)耐受力差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。因此，原代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng)，但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同，如199系列培養(yǎng)基、MEM系列培養(yǎng)基均有Hanks′系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle′s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。但是有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力，選擇合適的緩沖系統(tǒng)具有重要的作用。
在配制細(xì)胞培養(yǎng)液時(shí)，新配制的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中pH值下降產(chǎn)生的原因較多。在細(xì)胞生長非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快，此時(shí)可以通過及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時(shí)，可以通過以下幾種方法解決：
1) 按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之間時(shí)對應(yīng)的CO2濃度為5％到10％；
2) 改用不依賴CO2培養(yǎng)液；
3) 松開瓶蓋1/4 圈。在培養(yǎng)液加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度；
4) 在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks′鹽配制的培養(yǎng)液；
5) 原代細(xì)胞如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。