【中國儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜，是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。　　　　使用注意事項　　　　1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細的膜過濾)?！　　　?.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用?！　　　?.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進液?！　　　?.使用緩沖溶液時，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上?！　　　?.長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機相(如甲醇等)，因為純水易長霉?！　　　?.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器?！　　　?.C18柱不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。　　　　8.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法；①以異丙醇作溶劑沖洗：②放在異丙醇中間用超聲波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。　　　　9.氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡?！　　　?0.如果進液管內(nèi)不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗?！　　　?1.要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。　　　　12.更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。　　　　液相色譜儀的維護　　　　1．HPLC的日常操作條件：溫度：10—30℃；相對濕度《80％；是恒溫、恒濕，遠離高電干擾、高振動設(shè)備?！　　　?．泵的保養(yǎng)：　　　　1)使用流動相盡量要清潔；　　　　2)進液處的沙芯過濾頭要經(jīng)常清洗；　　　　3)流動相交換時要防止沉淀；　　　　4)避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡;　　　　3．進樣器的保養(yǎng)：　　　　1)每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染；　　　　4．柱的保養(yǎng)：　　　　1)柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動；　　　　2)當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈；　　　　3)要注意流動相的脫氣；　　　　4)避免使用高粘度的溶劑作為流動相；　　　　5)進樣樣品要提純；　　　　6)嚴格控制進樣量；　　　　7)每天分析工作結(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品；　　　　8)每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗弧　　　?)若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機溶劑保存并封閉；　　　　5．檢測器(UV)的保養(yǎng)：　　　　1)紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時，打開檢測器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器?！　　　?)樣品池要保養(yǎng)。 有關(guān)液相色譜儀的系統(tǒng)組成介紹

液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相；

被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)；

在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別；

被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀；

數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；

下面將分別敘述其各自的組成與特點。

進樣系統(tǒng)

一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。

這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。

高壓泵的一般壓強為47～44X10Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時；

可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動速度；

這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變；

包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。

這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離。

分離系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管）；

內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成；

住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）。

固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成；

它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點；

加之其表面經(jīng)過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）；

或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。

因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應(yīng)。

基質(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。

根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。

這也進一步證明基質(zhì)粒度小，會提高分辨率的道理。

再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C；

通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。