酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 基本原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的基本原理是將過量抗體（抗原）包被于載體上，通過抗原抗體反應(yīng)使酶標(biāo)記抗體（抗原）也結(jié)合在載體上，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記抗體（抗原）后，加入底物顯色，定性或定量分析有色產(chǎn)物確定待測(cè)物的存在與含量的檢測(cè)技術(shù)。

（二） 技術(shù)類型

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的主要技術(shù)類型有雙抗體夾心法、間接法、競爭法、捕獲法等。

1．各種技術(shù)類型的原理如下：雙抗體夾心法用于檢測(cè)抗原。它是利用待測(cè)抗原上的兩個(gè)抗原決定簇A和B分別與固相載體上的抗體A和酶標(biāo)記抗體B結(jié)合，形成抗體A-待測(cè)抗原-酶標(biāo)抗體B復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗原含量成正比，屬非競爭性反應(yīng)類型。

間接法用于測(cè)定抗體。它的原理是將已知抗原連接在固相載體上，待測(cè)抗體與抗原結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，形成抗原-待測(cè)抗體-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗體量成正比，屬非競爭性反應(yīng)類型。

競爭法既可用于檢測(cè)抗原又可用于檢測(cè)抗體。它是用酶標(biāo)抗原（抗體）與待測(cè)的非標(biāo)記抗原（抗體）競爭性的與固相載體上的*抗體（抗原）結(jié)合，待測(cè)抗原（抗體）多，則形成非標(biāo)記復(fù)合物多，酶標(biāo)抗原與抗體結(jié)合就少，也就是酶標(biāo)記復(fù)合物少，因此，顯色程度與待測(cè)物含量成反比。

捕獲法用于測(cè)定IgM類抗體。固相載體上連接的是IgM的二抗，先將標(biāo)本中的IgM類抗體捕獲，防止IgG類抗體對(duì)IgM測(cè)定的干擾，此步驟也是其稱為捕獲法的原因所在，然后再加入特異抗原和酶標(biāo)抗體，形成抗體IgM-IgM-特異抗原-酶標(biāo)抗體的復(fù)合物，復(fù)合物含量與待測(cè)IgM成正比，也屬非競爭性反應(yīng)類型。