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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 GCK 人葡萄糖激酶 規(guī)格： 48T/96T

 GPI 人葡萄糖6磷酸異構酶 規(guī)格： 48T/96T

 SPA 人葡萄球菌蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 Tetanus Ab 人破傷風抗體 規(guī)格： 48T/96T

 ODF 人破骨細胞分化因子 規(guī)格： 48T/96T

 Prednisolone 人*龍 規(guī)格： 48T/96T

 SMM 人平滑肌肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 Syk 人脾臟*激酶 規(guī)格： 48T/96T

 CORT 人皮質酮/腎上腺酮 規(guī)格： 48T/96T

 Cortisol 人* 規(guī)格： 48T/96T

 CLA 人皮膚淋巴細胞相關抗原 規(guī)格： 48T/96T

 SRF/IF 人皮膚反應因子/炎性因子 規(guī)格： 48T/96T

 DPT 人皮膚蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CTACK/CCL27 人皮膚T細胞虜獲趨化因子 規(guī)格： 48T/96T

 FSA 人胚胎性硫糖蛋白抗原 規(guī)格： 48T/96T

 CIAP 人牛小腸堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

 FⅫ 人*Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T

 FⅩⅢ 人*ⅩⅢ 規(guī)格： 48T/96T

 FⅩ 人*Ⅹ 規(guī)格： 48T/96T

 FⅨ 人*Ⅸ 規(guī)格： 48T/96T

 Ⅷ-Ag 人*Ⅷ相關抗

硫化銨 12135-76-1

XL10-Gold 感受態(tài)細胞 100ul*50硼酸*酯 121-43-7

三乙胺 121-44-8

*氧基磷 121-45-9

1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵 12150-46-8

5-芐氧基吲哚 1215-59-4

3,4,5-三氟苯甲酸 121602-93-5

對乙酰胺基苯磺酰氯 121-60-8

N,N-二三異丙酯 121-69-7

3-羥基苯乙酮 121-71-1

2-氨基-5-硝基* 121-88-0

間硝基苯乙酮 121-89-1

間硝基苯甲酰氯 121-90-4

間硝基苯甲酸 121-92-6

4'-甲氧丙酮 121-97-1

4-甲氧基苯甲酸甲酯 121-98-2

對甲基苯乙酮 122-00-9

4-氯苯甲酰氯 122-01-0

4-異丙基環(huán)己醇 122-03-2

4-硝基苯甲酰氯 122-04-3

1,1,3,3-四乙氧基丙烷 122-31-6

二* 122-39-4

原甲酸三乙酯 122-51-0

(R)-3-叔丁氧羰基氨基吡咯烷 122536-77-0

(S)-3-羥基吡咯烷鹽酸鹽 122536-94-1

苯亞甲基丙酮 122-57-6

苯氧乙酸 122-59-8

丙酸芐酯 122-63-4

1-BOC-吡咯烷-3-甲酰胺 122684-34-8

原 規(guī)格： 48T/96T

 FⅢ 人*Ⅲ 規(guī)格： 48T/96T

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。