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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 TF 豬組織因子 規(guī)格： 48T/96T

 t-PA 豬組織型纖溶酶原激活劑 規(guī)格： 48T/96T

 HIS 豬組胺 規(guī)格： 48T/96T

 TGF-β1 豬轉(zhuǎn)化生長因子β1 規(guī)格： 48T/96T

 MHCⅢ/SLAⅢ 豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類 規(guī)格： 48T/96T

 MHCⅡ/SLAⅡ 豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類 規(guī)格： 48T/96T

DH5α 感受態(tài)細(xì)胞 TNF-α 豬腫瘤壞死因子α 規(guī)格： 48T/96T

 ADP 豬脂聯(lián)素 規(guī)格： 48T/96T

 Lp-α 豬脂蛋白α 規(guī)格： 48T/96T

 apo-B100 豬載脂蛋白B100 規(guī)格： 48T/96T

 apo-A1 豬載脂蛋白A1 規(guī)格： 48T/96T

 AChRab 豬乙酰*受體抗體 規(guī)格： 48T/96T

 ACh 豬乙酰* 規(guī)格： 48T/96T

 IGFBP-3 豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3 規(guī)格： 48T/96T

 IGF-2 豬胰島素樣生長因子2 規(guī)格： 48T/96T

 IGF-1 豬胰島素樣生長因子1 規(guī)格： 48T/96T

 INS 豬胰島素 規(guī)格： 48T/96T

 OxLDL 豬氧化低密度脂蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 PDGF 豬血小板衍生生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 PAF 豬血小板活化因子 規(guī)格： 48T/96T

 FDP 豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T

 Fbg 豬血纖蛋白原 規(guī)格： 48T/96T

 TM 豬血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 NO 豬血清一氧化氮 規(guī)格： 48T/96T

 VWF 豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子 規(guī)格： 48T/96T

氰胺 420-04-2

丙酮基膦酸二甲酯 4202-14-6

氯代(鄰氯)二苯基甲烷 42074-68-0

2-氨基-3-硝基吡啶 4214-75-9

2-氨基-5-硝基吡啶 4214-76-0

1,1,1-三氟丙酮 421-50-1

N-甲基羥胺鹽酸鹽 4229-44-1

2,3-二氫-5-氯吲哚酮 42348-86-7

beta-*乙酯鹽酸鹽 4244-84-2

氨基甲酸叔丁酯 4248-19-5

2,2',4'-三氯苯乙酮 4252-78-2

異丁酰醋酸甲酯 42558-54-3

叔丁基甲基馬來酸酯 42726-73-8

D-纈氨醇 4276-9-9

5-甲基異惡唑-4-甲酸 42831-50-5

吡啶-3-磺酰氯鹽酸鹽 42899-76-3

四丁基氟化銨 429-41-4

氯代特戊酰氯 4300-97-4

2,3-丁二酮 431-03-8

1,1-二溴-3,3,3-三氟丙酮 431-67-4

4,6-二氯-5-甲基嘧啶 4316-97-6

注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。