對于需要消化傳代的原代細(xì)胞，每一次的消化都是對這個細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好Z至關(guān)重要的考驗。很多同學(xué)都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長越差。
  在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時間對細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣啊。。。呵呵。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細(xì)胞為例）
具體操作：
      1）.首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，（這是前奏，即為*步，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。
2）.然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了。）
3）.吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。
4）.然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（然后根據(jù)實際情況你自己把握）。這是第四步。
 其實還可以有第五步，對于特別難消化的細(xì)胞和對胰酶特別敏感的細(xì)胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能Z大限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到Z低，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠*。
 當(dāng)然了，如果原代細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞，像RAW264.7，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細(xì)胞時把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細(xì)胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。
含量測定    20mg    140716-200501    脫氧核糖腺嘌呤核苷酸鈉
含量測定    20mg    140717-200501    脫氧核糖胸腺嘧啶核苷酸鈉 
含量測定    20mg    140718-200501    脫氧核糖鳥嘌呤核苷酸鈉 
含量測定    20mg    140719-200501    一磷酸腺苷鈉
含量測定    0.5ml    140721-200601    角鯊烯
鑒別    20mg    140723－200501    γ-氨酪酸
HPLC法含量測定    50mg    140728-200803    胸腺五肽
HPLC法含量測定    25mg    140729-200501    賴脯胰島素
HPLC法含量測定    20mg/4℃    140730-20060    醋酸奧曲肽
鑒別用    1.6PNA單位/支    140731-200501    尤瑞克林
原代細(xì)胞