大鼠纖維母細胞；1/EJ 1-1復蘇操作流程：
 
1. 準備工作，開水浴鍋，預熱試劑，超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應細胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后風機吹 10min 后，酒精擦拭臺面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養(yǎng)液
3. 在液氮罐中取出細胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min
4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內(nèi)，擦干管壁，用 1ml 頭將細胞轉移到已加培養(yǎng)液的離心管中
5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平
6. 將離心好的細胞棄上清，加入 5ml *培養(yǎng)基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產(chǎn)生氣泡，將細胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中，補加 5ml 培養(yǎng)液
7. 混勻，十字法或者 8 字法
8. 將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。