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技術(shù)文章

反相C18色譜柱選擇困難癥

閱讀:189發(fā)布時間:2022-8-18

  色譜柱的選擇,對于分析方法建立和日常檢測,重要么?選錯了會怎樣?





  額,估計做過實驗的人員都會懂選錯柱子的痛:





  這可將會產(chǎn)生塔板數(shù)低、柱床易變性、壽命變短、保留時間漂移,定量精度差,出現(xiàn)新的干擾峰等問題,要耗費大量的寶貴時間進行排查色譜峰異常。





  于是。。。





  每次面對色譜柱選擇時,都十分糾結(jié)。





  ******的小編***近魏瓔珞附體,馬上為各位小主奉上:





  色譜柱“選擇困難癥"良藥!





  據(jù)統(tǒng)計80%的有機化合物的都能在反相液相色譜方法下完成定性定量,而C18固定相制作工藝穩(wěn)定性是目前*******的,因此反相硅膠基質(zhì)C18的應(yīng)用占了反相色譜的70%。





  那么:了解反相C18色譜柱廠商開發(fā)的三大技術(shù)方向,基本***能選擇到合適的色譜柱!





  改善堿性物質(zhì)的峰型





  解決峰型差影響定性定量******度的問題。





  提高球形硅膠基質(zhì)純度





  因為硅膠內(nèi)金屬雜質(zhì)的存在,可使得硅醇基過度活化,以至某些堿性化合物在酸性條件下仍呈現(xiàn)拖尾峰,





  所以硅膠只要純度越高,填料基質(zhì)對樣品的出峰影響***越小。





  這***是市面色譜柱廠商宣傳“99.999%高純硅膠"的原因。





  其中我們常說的B類硅膠***是高純硅膠,A類硅膠是早期的硅膠,含金屬雜質(zhì)比較多。





  降低硅醇基含量





  由于空間位阻的存在,鍵合反應(yīng)***多只能覆蓋50%的硅羥基,超過一半硅羥基是活性硅羥基,堿性分析物在硅膠柱基質(zhì)C18色譜柱上容易產(chǎn)生的拖尾。





  如果將有效封尾率提高,可避免殘余硅醇基對堿性物質(zhì)的吸附作用。





  在C18鏈上嵌入極性基團





  除了對填料進行封尾從而降低殘余硅醇基,也能采用屏蔽活性硅醇基的策略,在C18鏈上嵌入一個極性基團。





  因為極性基團的引入能夠和流動相中的水形成氫鍵,使填料表面形成一層“水膜",減弱了硅膠表面殘留的硅羥基和堿性化合物的相互作用,從而極大地改善了堿性化合物的峰形。





  此外極性基團還能改善對極性物質(zhì)的保留。





  提高極性化合物的保留





  通過極性封尾,降低碳覆蓋率,增加極性嵌入基團,保留更多的硅羥基,可解決極性較大的目標物在傳統(tǒng)的C18基本無保留的問題。





  采取以上的修飾方法后,可直接提高色譜柱的極性,





  依據(jù)“相似相溶"的原理,極性物質(zhì)***能很好的保留在色譜柱上,并且色譜柱能在100%水溶液流動相中穩(wěn)定運行。





  這類C18在市面也叫親水性C18,簡寫為“AQC18",特別適合分析酸性化合物。





  增加硅膠基質(zhì)色譜柱pH值使用范圍





  解決高純硅膠的局限性,簡化方法開發(fā)過程。





  高純硅膠并不是******的,具有一定的局限性。





  當(dāng)處于極限PH使用時,如PH<2時,硅醇基處于未解離的狀態(tài),此時堿性化合物保留不足;如PH>8時,硅醇基******解離,硅膠基體逐漸溶解。





  而離子型化合物(酸、堿性、兩性化合物)在色譜柱上的保留時間和選擇性,會隨著pH的變換而變化,較高pH條件下有利于增加堿性化合物的保留也有利于提高化合物質(zhì)譜響應(yīng)的靈敏度,





  因此在方法開發(fā)時候耐受寬PH值的色譜柱***變得很有必要性了!





  聚合物包被技術(shù)





  因為化合物的穩(wěn)定保留區(qū)都是在******PH條件下,所以寬pH值色譜柱對創(chuàng)建穩(wěn)定





  ******的HPLC分析方法具有價值。





  如E家色譜柱,通過在硅膠外層“鍍上"一層聚合物,來抵擋高PH流動相的對脆弱硅膠的侵蝕。





  雜化顆粒





  如W家色譜柱,通過在硅膠填料的結(jié)構(gòu)上嫁接了甲基或乙基,來增加顆粒表面溶解被腐蝕的難度,提高色譜柱******PH的耐受能力。





  雙齒鍵合技術(shù)





  如A家色譜柱,采用了雙齒鍵合技術(shù)和雙封端技術(shù)。





  雙齒鍵合技術(shù)的“橋型"結(jié)構(gòu),相當(dāng)于一個保護層,增加對高PH值的耐受能力。





  灌下這碗良藥,色譜柱“選擇困難癥"可是了?


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