成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
會(huì)員1.png)
成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
閱讀：3348發(fā)布時(shí)間：2022-8-20
反相洗脫溶劑強(qiáng)度：（強(qiáng)度因數(shù)S）
溶劑 | * | 異丙醇 | 乙醇 | 二惡烷 | 丙酮 | 乙腈 | 甲醇 | 水 |
| S | 4.5 | 4.2 | 3.6 | 3.5 | 3.4 | 3.2 | 3.0 | 0 |
1.二元流動(dòng)相：水為底劑，加入一定比例的與水混溶的有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑（甲醇、乙腈）
2.多元流動(dòng)相：
a.對(duì)于難分離的物質(zhì)，可以嘗試加入一定比例洗脫強(qiáng)度不同的有機(jī)溶劑，如：異丙醇、四
氫呋喃等
b.當(dāng)色譜峰拖尾時(shí)，可加入有機(jī)堿類掃尾劑，如：三乙胺
3.減小殘留硅羥基對(duì)分離的影響可采取以下措施：
a.流動(dòng)相中加入三乙胺等硅羥基的競(jìng)爭性試劑，減小拖尾。
b.改變流動(dòng)相的pH值（根據(jù)色譜柱和樣品的性質(zhì)）。
c.EDTA去除金屬雜質(zhì)
d.利用鹽效應(yīng)減弱殘存硅羥基的干擾
按照溶劑會(huì)影響選擇性的特征（包括酸性、堿性、偶極性等）選用不同的RPC溶劑。
不同的溶劑可依據(jù)這些特性來分類，以甲醇、乙腈、*為代表溶劑，對(duì)于實(shí)際方法建立的意義在于：一般只需選擇這三種溶劑，即可將選擇性達(dá)到分離要求。
下圖陰影區(qū)域?yàn)镸eOH、ACN、THF的選擇性
非極性、非離子化合物的RPC保留規(guī)則：
弱非鍵合硅膠＜＜氰基＜C1（TMS）＜C3 ＜C4＜苯基＜C8≈C18（強(qiáng)
Opalshell-C18 應(yīng)用——化工及制藥中間體
溶劑類型的選擇
非離子化樣品，實(shí)驗(yàn)條件對(duì)選擇性改變的相對(duì)大小影響排序：
溫度＜有機(jī)相比例＜溶劑類型≈色譜柱類型
上圖顯示為反相HPLC 色譜法溶劑強(qiáng)度列線圖
下圖為反相流動(dòng)相組份UV吸收值與波長的關(guān)系
反相離子抑制色譜流動(dòng)相的選擇：
通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，抑制樣品解離，增加樣品在固定相中的溶解度，以達(dá)到分離弱酸和弱堿的目的。
分離弱酸（3.0≤pKa≤7.0）和弱堿（7.0≤pKa≤8.0）時(shí)，可用離子抑制色譜法。
離子抑制劑：弱酸（1%醋酸、TFA）、弱堿（1%氨水）、緩沖鹽（磷酸鹽、乙酸鹽）
?流動(dòng)相pH對(duì)反相保留的影響與樣品類型（酸、堿、中性）的關(guān)系
當(dāng)某種酸（HA）和堿（B）發(fā)生解離（即從不帶電形式轉(zhuǎn)化），其疏水性將會(huì)大大減弱（親水性增強(qiáng)）。因此，在RPC中的保留值k可能下降10~20倍
當(dāng)pH增加，酸失去質(zhì)子（發(fā)生解離）；而當(dāng)pH降低時(shí)，堿獲得質(zhì)子（也發(fā)生解離）；因此隨pH增加，酸的RPC保留值減小，而堿的則增大。
流動(dòng)相選擇：
反相離子對(duì)色譜流動(dòng)相的選擇：
在流動(dòng)相中加入與被測(cè)離子相反電荷的離子對(duì)試劑，使之形成中性的離子對(duì)化合物，從而增加樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增加，分離改善。分配系數(shù)的大小主要取決于離子對(duì)化合物的解離平衡常數(shù)和離子對(duì)試劑的濃度。
分離機(jī)理以RPIC分離堿類物質(zhì)為例，用離子對(duì)模式說明分離機(jī)理
?分離pKa<3.0的酸及pKa>8.0的堿時(shí)，采用離子對(duì)色譜法。
?分析堿性樣品常用離子對(duì)試劑：烷基磺酸鹽（庚烷磺酸鈉）
?分析酸性樣品常用離子對(duì)試劑：季銨鹽（四丁基氫氧化銨）
1.離子對(duì)試劑濃度：0.003～0.01mol/L
2.調(diào)節(jié)pH值，改變分離選擇性
3.柱溫改變分離選擇性，檢測(cè)過程中******溫度恒定。
離子化樣品，實(shí)驗(yàn)條件對(duì)選擇性改變的相對(duì)大小影響排序：
緩沖液濃度與種類＜溫度＜有機(jī)相比例＜溶劑類型≈色譜柱類型＜pH
更多關(guān)于反相色譜流動(dòng)相的選擇 或者是需要購買反相色譜柱。歡迎或者搜索成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
儀表網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼