成都摩爾科學儀器有限公司
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閱讀：178發(fā)布時間：2022-8-20
液相色譜技術課件——色譜分析技術交流
高效液相色譜柱選型與維護
高效液相色譜柱內容提要：
HPLC分析方法建立
色譜柱結構 了解色譜柱結構
直管型液相色譜柱 卡套型保護柱，柱前過濾器
色譜柱類型 選擇色譜柱類型
按液相色譜分離模式 色譜條件優(yōu)化
色譜柱參數(shù) 熟悉填料參數(shù)
填料種類、粒徑、孔徑、載量、比表面積等參數(shù)對分析分離的影響。
色譜柱維護
色譜柱使用常見問題和清洗維護
分析型及半制備型色譜柱構型
從材質上分：不銹鋼和PEEK（聚醚醚酮）材質PEEK 材質優(yōu)缺點——樣品對金屬離子比較敏感時，選擇PEEK材質比較合適，比如某些蛋白分析會用到PEEK材質的分析柱，主要***是考慮到這方面的因素；
不銹鋼材質優(yōu)缺點——大部分小分子化合物的分析，選擇不銹鋼材質色譜柱居多，特別是當流動相
體系使用到*（THF）或DMSO等一些溶解性較強的溶劑時，必須選擇不銹鋼材質
通過可控的聚合反應或其他項分離技術直接形成連續(xù)、整體型柱床
保護柱構型
結構上分：卡套式（柱芯加柱套）和直接填裝的短柱
直接填裝短柱優(yōu)缺點——實質***是短的色譜柱，填裝的填料跟分析柱填料******一樣。生物樣品分析中，用這種類型保護柱居多，除可過濾一些不溶顆粒外，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質。缺點是，一次性使用，污染嚴重時，只能報廢。
卡套式保護柱優(yōu)缺點——可反復使用，柱芯污染后可替換，廠家會提供配套的保護柱芯，但購買時需要注意，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認柱芯中的填料類型再購買。
保護柱——不同連接方式
連接方式上分：獨立式和直連式
獨立式保護柱優(yōu)缺點——保護柱和分析柱之間需要一段管路連接，連接不當容易產(chǎn)生死體積。
直連式保護柱優(yōu)缺點——保護柱接口可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時建議用直連式保護柱；缺點：購買時需******接口與分析柱匹配。
保護柱選擇考慮以下幾方面因素：
?除非特殊情況，一般選擇填料基質與分析柱基質******相同的保護柱。
?選擇保護柱尺寸可按柱體積計算，保護柱體積按分析柱體積的5%~10%即可；
保護柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用
使用保護柱的目的在于延長分析柱的使用壽命，當分析柱造價昂貴時，保護柱的價值尤其能體現(xiàn)，某些情況下，當使用的分析柱本身******便宜，保護柱并非必選，推薦使用柱前過濾器更合適。
柱前過濾器與保護柱兩者外形相似，差異主要在于：保護柱內芯裝有填料，而柱前過濾器內芯是可更換的濾片（一般為帶孔的不銹鋼燒結板）
柱前過濾器——通用性強，任何分析柱前都可使用，因其濾芯只起到過濾和截留雜質的作用，濾片污染后可超聲清洗，反復使用。
保護柱——柱中填料除了起截留雜質的作用外，也可除去樣品中易吸附的雜質，這一點對生物樣品分析尤其重要。
保護柱使用注意事項 :
? 獨立式保護柱與分析柱連接時，連接管路盡可能短，且接口切面平滑，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應。
?卡套式保護柱一般未標注液流方向，使用時******自行標注，并按照標注方向來使用，以免正反向使用后，截留的雜質污染分析柱。
?直接填裝的短柱型保護柱，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時，可不接分析柱進行反向清洗，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
?保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對填料表面修飾有影響。
?如同一保護柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保護柱需先清洗并用流動相平衡保護柱一段時間后，再接色譜分析柱使用。
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