成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
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閱讀：969發(fā)布時(shí)間：2022-8-20
參數(shù) 熟悉填料參數(shù)
填料種類(lèi)、粒徑、孔徑、載量、比表面積等參數(shù)對(duì)分析分離的影響
固定相選擇——色譜柱物理參數(shù)
色譜柱物理參數(shù)：
柱長(zhǎng)、內(nèi)徑：4.6×250mm 粒徑：1.7、3、5、10um 填料顆粒形狀：球形、無(wú)定形 孔徑：80?、120?、200?、300? 比表面積：100m ~450m
色譜柱不同孔徑下分離效果對(duì)比
Bio-C18-300 ? vs Bio-C18-200 ?
色譜柱柱：bio-c18
流動(dòng)相：A：0.025米H PO pH值3
（調(diào)整的三乙胺），B：ACN
流量：1毫升/分鐘
檢測(cè)器：紫外278 nm
柱TEM：25度
注射量：20?L
孔尺寸和表面積相互影響：孔徑增加，表面積會(huì)以大致同樣的比例縮小。******的可以進(jìn)樣量和表面積成正比。
色譜柱不同粒徑下分離效果對(duì)比
色譜柱：proteomix WCX NP，4.6 x 50毫米
流動(dòng)相A：20毫米磷酸鈉緩沖液，pH值6.5，
流動(dòng)相B：+ 1 M NaCl，流量：0.5毫升/分鐘，溫度：環(huán)境
梯度：0-25分鐘從0-****，檢測(cè)：214 nm
樣本：5?L注射核糖核酸酶A，和（1毫克/毫升）
填料顆粒物理構(gòu)造
多孔顆粒 ——-經(jīng)典的全多孔基質(zhì)色譜柱
表面多孔殼顆?！?span style="font-family:Calibri;white-space:normal;">核殼柱
灌注顆?！?適用于叫高流速下大分子樣品的制備分離
填料顆粒與色譜柱柱效關(guān)系
填料顆粒物理構(gòu)造
適合高通量分析
在HPLC上達(dá)到UPLC的分離效果
低壓下實(shí)現(xiàn)快速分析
快速檢測(cè)
分析時(shí)間短，檢測(cè)效率高
節(jié)省溶劑消耗
降低分析成本
色譜柱耐受性好，壽命長(zhǎng)
儀器損耗降低
高分辨率
柱效高，檢測(cè)靈敏度高
2.6um核殼柱可以達(dá)到多孔硅2um粒
徑的分離效率
背壓低
缺陷： 大濃度進(jìn)樣容易過(guò)載，不適合樣品制備
Opalshell-C18色譜柱應(yīng)用——中藥
固定相選擇——色譜柱化學(xué)參數(shù)
色譜柱化學(xué)參數(shù)
基質(zhì)：硅膠、聚合物、其它
載量：鍵合相密度、碳載量
鍵合相：類(lèi)型及方式
封端：技術(shù)和效果
硅膠優(yōu)勢(shì)：
高機(jī)械強(qiáng)度，高壓下良好的耐受性
與不同的配基鍵合，分析不同樣品
與水和所有有機(jī)溶劑兼容
尤其適用于梯度洗脫
缺點(diǎn)：
高pH條件下耐受性差，表面硅羥基帶來(lái)堿性樣品檢測(cè)的的拖尾
聚合物優(yōu)勢(shì)：
良好的 pH耐受性
缺點(diǎn)：
色譜柱柱效較同粒徑硅膠基質(zhì)的低，在不同有機(jī)溶劑中出現(xiàn)不同程度的溶脹，不建議梯度洗脫
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