成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
會員1.png)
成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
閱讀：614發(fā)布時(shí)間：2022-8-20
成都摩爾科學(xué)儀器有限公司教你如何使用制備柱，如有需要?dú)g迎。更多關(guān)于色譜技術(shù)支持，歡迎致電。
如何使用制備柱
應(yīng)用領(lǐng)域 ——
A. 學(xué)校的天然藥化、生藥學(xué)、中藥學(xué)、多肽等相關(guān)課題組
B. 大型原料藥生產(chǎn)企業(yè)的研發(fā)機(jī)構(gòu)
C. 大型醫(yī)藥研發(fā)機(jī)構(gòu)
D. 外包型的藥品相關(guān)企業(yè)
E. 其它機(jī)構(gòu)
如何使用制備柱
如何選擇制備柱
如何使用制備柱 步驟 使用人員信息 目的 1 制備儀器的流速、耐壓 初步確定******支持的制備柱直徑 2 純化產(chǎn)品類型－天然物、多肽還是小分子 大致確定制備柱長度，預(yù)計(jì)填料類型 3 需要純化的產(chǎn)品量 根據(jù)載量估算制備柱的直徑 4 需要純化產(chǎn)品在分析柱上的條件 選擇合適的填料
***優(yōu)狀態(tài)下載量、流速與直徑的關(guān)系
1| 長度250mm | |||||
| 直徑（ mm ） | 4.6 | 10 | 21.2 | 30 | 50 |
| 填料裝填量（ g g ） | 2.4 | 11.1 | 50 | 100.2 | 278 |
| α α >1.3 載量（ mg ） | 12 | 56 | 250 | 501 | 1390 |
| α α <1.3 載量（ mg ） | 0.24 | 1.1 | 5 | 10 | 28 |
| 工作流速 （ mL/min ） | 1 | 8 | 21 | 43 | 110 |
| 較高流速（ mL/min ） | 2 | 12 | 30 | 55 | 180 |
α = 分離度
制備柱的直徑一般由載量決定。通常條件下，制備色譜柱的載量為裝填量的0.01%~0.5%之間，如果載量過小，則樣品易吸附在柱上難以洗脫；如果載量過高，可能造成部分樣品無法吸附而直接流出
如何使用制備柱
平行放大理論－載量
? 首先需在分析柱上摸索出合適的條件，得到分析柱的載量
? 計(jì)算出 放大因子 SF
? 制備柱的載量 = SF × 分析柱上的載量
如何使用制備柱
如何使用制備柱
? 需要考慮到系統(tǒng)耐壓的問題平行放大理論－梯度條件
?梯度放大關(guān)鍵－流動相在單位時(shí)間內(nèi)流過色譜柱的體積
?根據(jù)分析柱上的梯度時(shí)間來計(jì)算出制備柱上的梯度時(shí)間
?同樣需要考慮系統(tǒng)耐壓的問題
如何使用制備柱
制備時(shí)引導(dǎo)性的焦點(diǎn)問題－如何看待分離度
a) 合理利用超載 → 制備色譜的峰不需要和分析色譜一樣分的很開，而是盡可能靠近與重疊
b) 選擇******填料 → 直接決定分離度，進(jìn)一步?jīng)Q定載量，如果載量夠高的話，不重疊的峰可能比其它柱子重疊的峰單次純化量更大
c) 極性與疏水性的選擇正確與否很重要，道理同分析柱
制備時(shí)引導(dǎo)性的焦點(diǎn)問題－如何看待流速
a) 制備柱的流速***終由儀器決定 ，高流速意味著更高的效率，但是對柱床的沖擊也更大，一定程度上會影響壽命
b) 每種規(guī)格的制備柱都有一個(gè)******流速，******流速下的壓力即同比條件下分析柱的壓力
c) 優(yōu)先推薦 10μ的填料來增加流速的可調(diào)性。
制備時(shí)引導(dǎo)性的焦點(diǎn)問題－如何看待壽命
a) 絕大多數(shù)制備樣品在酸性條件下進(jìn)行，加 TFA 走梯度是***常見的。 TFA 酸性強(qiáng)，有時(shí)會造成鍵合的 C18 鏈的水解脫落，所以耐酸的填料會更好，成都摩爾科學(xué)儀器有限公司提供的 Amethyst C18-H色譜柱等****** PH 為 1.5 ，****** pH 達(dá) 11.0 ，大多其他品牌的產(chǎn)品 pH 為2.0~8.0 ，因此 成都摩爾科學(xué)儀器有限公司提供的Amethyst C18-H色譜柱具有更長的壽命。
b) 對于喜歡加 DMSO 增溶的實(shí)驗(yàn)室，建議盡量不加或少加；
c) 色譜柱柱頭塌陷和污染造成的壽命縮短，是因?yàn)殚L期的高流速跑樣品以及上樣多雜質(zhì)也多造成。因此加保護(hù)柱顯得必要。
b) 用 50 : : 50 的 DMSO : : 甲醇代替 ****DMSO 進(jìn)樣 → 減少樣品在流動相中的析出
c) 增加梯度中 100 ％有機(jī)溶劑的時(shí)間段 → 減少殘留
d) 使用制備型保護(hù)柱套 → 制備人員 一定要了解不用保護(hù)柱的后果有多嚴(yán)重。
制備柱的延伸產(chǎn)品
a) 制備大都從分析篩選方法，有時(shí)也從 LC- MS 快速篩選；成都摩爾科學(xué)儀器有限公司公司提供各種不同固定相各種規(guī)格的從 MS 柱到分析到制備。
b) 保護(hù)柱套和柱芯
c) 各種填料
d）
儀表網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼