成都摩爾科學儀器有限公司
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閱讀：386發(fā)布時間：2022-8-23
色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關外，***主要的是與日常的維護密切相關。色譜柱的使用壽命主要是根據(jù)柱效和柱壓兩個指標來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認為該色譜柱的使用壽命已經(jīng)結束。因此，延長色譜柱使用壽命的關鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的日常維護方法：
一. 流動相的pH應在使用范圍內(nèi)
成都摩爾科學儀器有限公司的色譜柱PH范圍值能夠達到Ph1.5-10.5。由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其pH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由于流動相的pH控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的pH值。
二. 去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導致色譜峰形拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45um濾膜。
三. 使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能******消除固體顆粒物質，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。成都摩爾科學儀器有限公司提供的每一款色譜柱都有專門的保護柱，并且該保護柱還能夠與其他品牌公司的色譜柱通用，如安捷倫，沃特斯，島津，等等。
如果確認色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進行補救：
1. 先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器，然后用甲醇/水=20/80 1.0ml/min
反向沖洗色譜柱180min。
2. 先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器，然后反向使用。
四. 正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會使其析出，堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結，柱壓上升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話：使用前要過渡，使用后要沖洗。具體方法如下：
1. 等度條件：使用緩沖鹽前需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗30min，
使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗
色譜柱過夜。
2. 梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗30min;分析完成后，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱45min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相中不含緩沖鹽。
3. 緩沖鹽析出的補救方法：
1)方案1：用甲醇/水=20/80以1.0ml/min流速35℃條件下反向沖洗色譜柱120min;
2)方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五. 防止強保留物質在色譜柱中存留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現(xiàn)出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。
清洗方法：
1. 未使用緩沖鹽：每天分析完成后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2. 使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。
3. 補救方法：
水 —— 乙腈 —— 氯仿(或異丙醇)—— 乙腈 —— 水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
A 色譜柱驗收
檢查外觀是否完好；
檢查柱子的規(guī)格型號，是否與您的需求相符；
如果您想對新色譜柱的性能進行測試，可以按照柱性能測試報告上的條件進行測試。
B 色譜柱安裝
該色譜柱與外徑為1/16英寸的PEEK管線或不銹鋼管線******匹配；
為減小死體積，柱前和柱后的管線內(nèi)徑應不超過0.01 英寸(0.25 mm)；
如果您使用的是PEEK管線，您應選擇PEEK接頭使管線與色譜柱連接；如果您使用的是不銹鋼管線，您可以選擇PEEK接頭或不銹鋼接頭，當使用不銹鋼接頭時，應確保管線與柱頭緊密結合后再固定韌環(huán)，這樣可以防止管線與色譜柱連接處產(chǎn)生死體積。
C 對流動相的要求
該反相色譜柱，可以使用水或有機溶劑作為流動相，并且為了特殊需要還可以在流動相中加入酸、堿、鹽；
該色譜柱不能耐受純水或純水溶液，流動相中有機相的比例不應低于5%；
該色譜柱的pH值耐受范圍為1.5-9.0，流動相的pH值不應超過這一范圍，否則色譜柱性能和壽命會受到影響；
對于緩和流動相，應確保不同溶劑間的良好互容，以免影響分析結果；
對于有機溶劑-緩沖溶液體系，應確保緩沖鹽不會析出；
不同流動相的黏度有差別，使用不同的流動相時，色譜柱產(chǎn)生的壓強會有差別；使用水(包括緩沖溶液)-乙腈體系時，乙腈含量為20%時產(chǎn)生的壓強******；使用水(包括緩沖溶液)-甲醇體系時，甲醇含量為50%時產(chǎn)生的壓強******；Diamonsil 2的******承受壓強遠高于反相模式下可能產(chǎn)生的******壓強；
在10-40 °C之間，使用較高的柱溫能夠降低色譜柱壓強并改善分離效果；
用于流動相配制的溶劑應為HPLC級或更******別，作為添加物的酸、堿、鹽盡量使用HPLC級別；
色譜柱入口和出口安裝了2 μm篩板，為避免色譜柱堵塞，流動相應經(jīng)0.45 μm濾膜或孔徑更小的濾膜過濾；
流動相應該有效脫氣后再使用，以避免在系統(tǒng)中產(chǎn)生氣泡導致的泵和檢測器不穩(wěn)定；
純水或緩沖鹽水溶液易滋生微生物造成流動相污染，純水或緩沖鹽水溶液作為流動相組分時，24小時內(nèi)應更換新的溶液。
D 轉換流動相的注意事項
您收到的色譜柱是保存在65%乙腈水溶液中的，使用前建議您用甲醇或乙腈對新色譜柱進行活化沖洗；
純有機溶劑或有機溶劑含量較高的流動相與含緩沖鹽的流動相變換，不應直接替換，兩者之間應使用10%甲醇水溶液或10%乙腈水溶液進行過渡，過渡溶劑體積不少于10倍柱體積；
用某一種流動相代替上一種流動相時，應確保兩者互容；
E 色譜柱保存
超過24小時的時間不使用色譜柱，******將色譜柱保存在乙腈或甲醇中；
操作時的流動相中若無酸、堿、鹽，可以用乙腈或甲醇沖洗20倍柱體積后直接封存；操作時的流動相中若有酸、堿、鹽，應先用10%甲醇水溶液或10%乙腈水溶液沖洗20倍柱體積，然后再用乙腈或甲醇沖洗，然后封存；
使用隨色譜柱一起的PEEK螺旋塞將色譜柱的入口和出口密封，以防止柱中溶劑揮發(fā)。
F 對樣品的要求
用于進樣的樣品溶液須經(jīng)0.45 μm濾膜或孔徑更小的濾膜過濾
如果樣品提取自復雜基質(比如動植物基質)，******對提取液進行適當?shù)募兓幚?，以避免污染色譜柱，影響分析效果和色譜柱壽命
安裝保護柱可以防止顆粒物堵塞色譜柱，并預先吸附強保留物質，以避免其污染色譜柱。
G 色譜柱再生方法
當色譜柱壓強明顯升高時可對色譜柱進行再生處理；用相當于20倍柱體積的溶劑按下列次序沖洗色譜柱：10％甲醇水溶液→甲醇→異丙醇→甲醇。該程序適用于賽分反相色譜柱：C18, C8,等等。如果色譜柱的壓力升高是由顆粒雜質堵塞引起，再生處理效果不明顯。
柱床體積計算方法：V=3.14*d2*L/4
d為色譜柱內(nèi)徑，單位為cm；L為柱長，單位為cm。
色譜柱規(guī)格 150 mm*4.6 mm 200 mm*4.6 mm 250 mm*4.6 mm
柱床體積 2.5 ml 3.3 ml 4.2 ml
成都摩爾科學儀器有限公司提供的產(chǎn)品系列包括：各類食品檢測和藥品檢測涉及的從分析到制備等規(guī)格齊全、填料齊全的液相色譜柱、氣相色譜柱、 純化填料、品種規(guī)格齊全樣品前處理固相萃取柱和免疫親和柱；檢測的色譜柱以及純化用的系統(tǒng)成套設備和各種填料；同時，成都摩爾科學儀器有限公司也是各品牌色譜柱、儀器的配件耗材(如氘燈、石墨管、單向閥等）、常規(guī)實驗室消耗品(如針頭過濾器(含滅菌器)、過濾膜(含除菌膜）、樣品瓶(含頂空瓶）及相關蓋墊、 移液器、標準品(食品和環(huán)境等）和各種分析檢測儀器(如液相色譜儀、氣相色譜儀、培養(yǎng)箱、生物安全柜、天平、pH計等綜合集成供應商。（）
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