賽分液相色譜柱在使用中的問(wèn)題
賽分液相色譜柱在使用前，******進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是******條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理;
a、******使用流動(dòng)相溶解樣品;
b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);
c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a、賽分液相色譜柱流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，******樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)期留在柱中);
b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng);
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果;降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度);
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，******使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制;
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行;
f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇
因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù)，賽分液相色譜柱使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求******柱效，******使用******流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用******流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用成都摩爾提供的反相色譜柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a.含水流動(dòng)相******在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。******加入，防止細(xì)菌生長(zhǎng);
b.流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì);
c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)賽分液相色譜柱的使用壽命，提高色譜柱柱性能。
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