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液相色譜使用中樣品預(yù)處理注意事情

閱讀：863發(fā)布時(shí)間：2022-8-24

摘要：高效液相色譜具有分離效率高、分析速度快和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，特別適合于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析。
目前，高效液相色譜已成為化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離技術(shù)，是分析化學(xué)家和生物化學(xué)家手中用于解決他們面臨的各種實(shí)際分析和分離課題的工具之一。
雖然，在檢測(cè)分析中使用了昂貴的、性能*的高檔精密儀器，但是，由于在樣品的前處理，標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，樣品液的測(cè)定，分析中的污染，儀器常見(jiàn)故障等問(wèn)題上的不注意，而引起大的系統(tǒng)誤差，使整個(gè)測(cè)定分析失敗。
現(xiàn)***液相色譜分析的應(yīng)用中樣品預(yù)處理注意的幾個(gè)環(huán)節(jié)，作簡(jiǎn)要分析,以達(dá)到更好的檢測(cè)效果。
樣品預(yù)處理方法
樣品預(yù)處理應(yīng)包括進(jìn)樣前的一切操作，除了稱(chēng)重、溶解、稀釋等步驟外，樣品需要：
①過(guò)濾；
②萃取；
③衍生化(柱前衍生)；
④液相色譜(低壓柱層析)
這些操作可以是手工進(jìn)行或?qū)嵭凶詣?dòng)化操作，樣品預(yù)處理的目的是除去干擾物、增加檢測(cè)器靈敏度(富集)、保護(hù)色譜柱等。樣品預(yù)處理同時(shí)也是為了避免色譜分離故障，其中，樣品萃取是關(guān)鍵的一步，要從大量的干擾物中萃取出微量組分難度極大。
有些樣品經(jīng)預(yù)處理后還不能作進(jìn)樣分析，需進(jìn)行衍生化處理，使一些無(wú)紫外吸收或無(wú)熒光的組分，經(jīng)過(guò)衍生化后能用紫外和熒光檢測(cè)器檢測(cè),這樣既提高了靈敏度，又改善了分離度(質(zhì)量變化)。樣品預(yù)處理的同時(shí)也會(huì)帶來(lái)一些問(wèn)題，如，樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不******或多種反應(yīng)物生成等。。。衍生反應(yīng)常會(huì)影響試驗(yàn)的******度，或者在整個(gè)樣品預(yù)處理過(guò)程中帶來(lái)誤差。
用于液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無(wú)顆粒，有顆粒會(huì)損壞進(jìn)樣器并阻塞柱頭。處理好的樣品在準(zhǔn)備上柱前應(yīng)對(duì)準(zhǔn)光線搖動(dòng)，檢查樣品溶液中有無(wú)顆粒。只要看到顆粒、混濁或乳化，***應(yīng)過(guò)濾一下，過(guò)濾膜要能截留住0.15μm以上的顆粒，樣品過(guò)濾的過(guò)程中可能引起：樣品被污染，因，過(guò)濾吸附降低樣品組分的含量，樣品溶劑揮發(fā)引起誤差。
萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分，或者，減少損壞柱的物質(zhì)(如，蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機(jī)溶劑萃取，要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對(duì)待測(cè)樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。
常用的有、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進(jìn)樣，有時(shí)需要濃縮或吹干濃縮，再用定體積的液體或流動(dòng)相溶解進(jìn)樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度，同時(shí)，避免了溶劑峰對(duì)樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外，還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽，萃取方法如下：
水溶性樣品
（1）酸性組分及生成的鹽萃取方法：
有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┙夂筮M(jìn)樣。
（2）堿性組分及生成的鹽萃取方法：
有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣。
3）中性組分萃取方法：
①有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后，直接用反相色譜法分析；
②脂溶性組分萃取方法:有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣；
分析中的污染
一般檢測(cè)的環(huán)境、容器、試劑都是影響測(cè)定結(jié)果的因素。
①環(huán)境污染
儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測(cè)結(jié)果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離，保持清潔，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，注意：防潮、防腐、防震、空氣相對(duì)濕度應(yīng)小于70 %為宜。
②容器
實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類(lèi)、瓷類(lèi)、石英類(lèi)、塑料類(lèi)等，在進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)按照待則樣品的要求來(lái)選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測(cè)結(jié)果的基本******。
③試劑
在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級(jí)純或分析純，如果，用含量有雜質(zhì)的試劑，則會(huì)出現(xiàn)雜峰而影響測(cè)定結(jié)果。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置
在配置標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中******使用同一批次配制的內(nèi)標(biāo)溶液以減少誤差。
(1)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。
(2)常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)存放在棕色溶液瓶中低溫保存。
(3)在配制維生素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。

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