在液相色譜分析方法中***重要的***是色譜柱的選擇，色譜分析人員面對幾百種色譜柱，我們該怎么選擇自己的色譜柱呢？
現(xiàn)在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據(jù)色譜柱的參數(shù)可以給我們提供一個初步的選擇，但由于各個儀器廠商的填料技術和鍵合技術都有差異，即使都是C18色譜柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數(shù)，仔細閱讀色譜柱說明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。
目前市場上主要以液相色譜為主，約占80%的比例。
在了解了液相色譜的基本知識后，液相色譜的選擇也***迎刃而解了。
柱長及內徑的選擇
長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時間也越長。250—300mm是***普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物;500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質的復雜樣品程序升溫分析。
內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進樣量***越多。當進樣量超過柱容量時，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。因此對于復雜樣品需要******分離，必須使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量***必須使用內徑大的柱子，目前實驗室使用***常見的柱子內徑一般是4.6mm。
一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。
液相色譜也叫層析法，它是一種高效能的物理分離技術，將它用于分析化學并配合適當?shù)臋z測手段，***成為色譜分析法。液相色譜***早應用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素(植物葉的提取液)的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，并逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗***可分別接得各種顏色的色素，并可分別進行鑒定。液相色譜也由此而得名。
現(xiàn)在的液相色譜早已不局限于色素的分離，其方法也早已得到了極大的發(fā)展，但其分離的原理仍然是一樣的，在液相色譜中存在兩相，其中一相是固定不動的，稱為固定相；另一相則不斷流過固定相，稱為流動相。液相色譜的分離原理***是利用待分離的各種物質在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
液相色譜由于混合物中各組分在性質和結構上的差異，與固定相之間產生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當?shù)闹髾z測方法結合，實現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。
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