液相色譜是目前物質(zhì)組分微量分析的重要方法之一。色譜分析中兩相是指具有大比表面積的固定相和攜帶有待分離的混合物流過固定相的流動(dòng)相。用液體作流動(dòng)相的稱液相色譜。
液相色譜又稱“液相層析"。一種色層分析方法，所用流動(dòng)相為液體。由于層析柱內(nèi)液體比氣體受的阻力大，故為了提高分析速度，通常采用高壓輸液方式，所以又稱為“高壓液相色譜"。根據(jù)固定相的不同可分為液—固色譜和液—液色譜；根據(jù)固定相與流動(dòng)相所發(fā)生平衡的類型不同，可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜等。用于有機(jī)物，無機(jī)物和高分子液體的分離及分析。
【簡(jiǎn)史】
植物學(xué)家茨維特(M.S.Tswett)于1906年******使用柱層析進(jìn)行了植物色素的分離，是液相色譜法中***古老的一種，近30年來發(fā)展成各種各樣的色譜分離法，并成為分析化學(xué)的一個(gè)重要部分。①經(jīng)典液相色譜法：流動(dòng)相由柱管上端靠自身重力向下流動(dòng)，在柱下部出口處逐份收集流出液，再用其他方法進(jìn)行測(cè)定，分析速度慢、效率低；②薄層色譜法：出現(xiàn)于40年代前后，操作方便，分析速度上有了改進(jìn)，但重復(fù)性差、定量困難；③高效液相色譜法：60年代初吉迪丁斯(J.C.Gidelings)將氣相色譜理論經(jīng)修正后用于液相色譜，為其現(xiàn)代化奠定了基礎(chǔ)。此后在技術(shù)上采用了高壓泵，高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，發(fā)展為分析速度快、分離效率高和操作自動(dòng)化的高效液相色譜。1971年亨利(R.A.Henry)等首先把它用于農(nóng)藥分析。
【高效液相色譜法】
高效液相色譜法是現(xiàn)代分析化學(xué)中***重要的分離方法之一。它起源于經(jīng)典的液相色譜法，其基本方法是將具一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶液作為流動(dòng)相，用泵將流動(dòng)相注入裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動(dòng)相帶入柱內(nèi)進(jìn)行分離后，各成分先后進(jìn)入檢測(cè)器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖或進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到測(cè)定結(jié)果。由于應(yīng)用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動(dòng)相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點(diǎn)。
高效液相色譜法適用于能在特定填充劑的色譜柱上進(jìn)行分離的藥品的分析測(cè)定，特別是多組分藥品的測(cè)定、雜質(zhì)檢查和大分子物質(zhì)的測(cè)定。有的藥品需在色譜分離前或后經(jīng)過衍生化反應(yīng)方能進(jìn)行分離或檢測(cè)。常用的色譜柱填充劑有：硅膠，用于正相色譜；化學(xué)鍵合固定相，根據(jù)鍵合的基團(tuán)不同可用于反相或正相色譜；離子交換填料，用于離子交換色譜；具一定孔徑的大孔填料，用于排阻色譜。
高效液相色譜儀基本由泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。檢測(cè)器***常用的為可變波長(zhǎng)紫外、可見光檢測(cè)器，其他檢測(cè)器如示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器等。色譜信息的收集和處理常用積分儀或數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行。梯度洗脫，可用兩臺(tái)泵或單臺(tái)泵加比例閥進(jìn)行程控實(shí)現(xiàn)。
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