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高效液相色譜的流動(dòng)相如何選擇?需考慮哪些因素?成都摩爾科學(xué)儀器有限公司

閱讀:191發(fā)布時(shí)間:2025-3-22

因?yàn)楦咝б合嗌V中它的流動(dòng)相是液體狀態(tài)。它具有很強(qiáng)的親和力并且能夠參與固定競(jìng)爭(zhēng)當(dāng)中。所以,正確的選擇流動(dòng)相對(duì)流動(dòng)相會(huì)影響分離度(組分的分離度)那么我們***要對(duì)溶劑要求:
     (一)溶劑對(duì)于我們要測(cè)試的樣品必須具備極性還有良好的選擇性,
     (2)我們的溶劑必須能跟檢測(cè)器匹配。我們?cè)谑褂米贤馕諜z測(cè)器的時(shí)候,必須要注意選用比紫外檢測(cè)器容器波長(zhǎng)要長(zhǎng)很多的溶劑。溶劑要與檢測(cè)器匹配。對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器,應(yīng)注意選用檢測(cè)器波長(zhǎng)比溶劑的紫外截止波長(zhǎng)要長(zhǎng)。溶劑要與檢測(cè)器匹配。對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器,應(yīng)注意選用檢測(cè)器波長(zhǎng)比溶劑的紫外截止波長(zhǎng)要長(zhǎng)。所謂溶劑的紫外截止波長(zhǎng)指當(dāng)小于截止波長(zhǎng)的輻射通過(guò)溶劑時(shí),溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收,此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明的,他能?chē)?yán)重干擾我們的組分分離。你們可以在網(wǎng)上搜索一下成都摩爾科學(xué)儀器有限公司。里面有詳細(xì)的解答
     對(duì)于折光率檢測(cè)器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相,以達(dá)******靈敏度
   
     (3)高純度。由于高效液相靈敏度高,對(duì)流動(dòng)相溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會(huì)引起基線(xiàn)不穩(wěn),或產(chǎn)生“偽峰"。痕量雜質(zhì)的存在,將使截止波長(zhǎng)值增加50~I(xiàn)OOnm。
      (4)化學(xué)穩(wěn)定性好。不能選與樣品發(fā)生反應(yīng)或聚合的溶劑。
       (5)低粘度。若使用高粘度溶劑,勢(shì)必增高壓力,不利于分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度過(guò)于低的溶劑也不宜采用,例戊烷、等,它們易在色譜柱或檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡,影響分離.
成都摩爾科學(xué)儀器有限公司流動(dòng)相性質(zhì):
2.流動(dòng)相的pH值 


采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí),通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱(chēng)為反相離子抑制技術(shù)。對(duì)于弱酸,流動(dòng)相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí),弱酸主要以分子形式存在;對(duì)弱堿,情況相反。分析弱酸樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。 


注:流動(dòng)相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用,減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺(如三乙胺)又稱(chēng)為減尾劑或除尾劑。

成都摩爾科學(xué)色譜柱
流動(dòng)相選擇方法
1:由強(qiáng)到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn),這樣可以很快地得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。 
2: 三倍規(guī)則 :每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中,注意觀(guān)察各個(gè)峰的分離情況。 
3: 粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):當(dāng)分離達(dá)到一定程度,應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。
一個(gè)理想的液相色譜流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有低粘度、與檢測(cè)器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。 
選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)方面: 


①流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。低交聯(lián)度的離子交換樹(shù)脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。 


②純度。色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過(guò)有關(guān),特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。 


③必須與檢測(cè)器匹配。使用UV檢測(cè)器時(shí),所用流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下應(yīng)沒(méi)有吸收,或吸收很小。當(dāng)使用示差折光檢測(cè)器時(shí),應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相,以提高靈敏度。 


④粘度要低(應(yīng)<2cp)。高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散、傳質(zhì),降低柱效,還會(huì)使柱壓降增加,使分離時(shí)間延長(zhǎng)。******選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。 


⑤對(duì)樣品的溶解度要適宜。如果溶解度欠佳,樣品會(huì)在柱頭沉淀,不但影響了純化分離,且會(huì)使柱子惡化。 


⑥樣品易于回收。應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。 

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