一、選擇流動(dòng)相應(yīng)該考慮哪些方面
一個(gè)性能******的
液相色譜流動(dòng)相溶劑需要具有粘度低,檢測器兼容性好,容易得到純品和低毒性等特征。
選擇流動(dòng)相的時(shí)候需要考慮下面幾個(gè)方面、
1、選擇的流動(dòng)相不應(yīng)該改變?nèi)魏翁盍闲再|(zhì)
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻
色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度
色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān),特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
3、必須與檢測器匹配
使用UV檢測器時(shí),所用流動(dòng)相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收,或吸收很小。當(dāng)使用示差折光檢測器時(shí),應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相,以提高靈敏度。
4、粘度要低(應(yīng)<2cp):
高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散、傳質(zhì),降低柱效,還會(huì)使柱壓降增加,使分離時(shí)間延長,******選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
5、對樣品的溶解度要適宜
如果溶解度欠佳,樣品會(huì)在柱頭沉淀,不但影響了純化分離,且會(huì)使柱子惡化。
6、樣品可以很好的發(fā)揮回收作用
應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑
二、選擇流動(dòng)相的幾點(diǎn)秘訣
1、從高到低
一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn),這樣可以很快地得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2、倍數(shù)翻倍規(guī)則
每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中,注意觀察各個(gè)峰的分離情況。
3、粗的變成細(xì)的,慢慢調(diào)整。
當(dāng)樣品的分離達(dá)到一定的條件時(shí)。,需要把郵寄溶劑從百分之10調(diào)整到百分之5.并且慢慢下調(diào)。直到各個(gè)組分在分離的情況下不在改變。