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高效液相色譜儀HPLC保留時(shí)間不重現(xiàn)故障解決方法

閱讀：135發(fā)布時(shí)間：2025-3-25

高效液相色譜儀HPLC時(shí)間保留不重現(xiàn)有2種情況，***是保留時(shí)間波動(dòng)和保留時(shí)間漂移。
時(shí)間漂移指的是沿著一個(gè)方向發(fā)生變化，而時(shí)間波動(dòng)則是無(wú)規(guī)律的波動(dòng)，吧保留時(shí)間漂移和波動(dòng)分開(kāi)來(lái)對(duì)找到問(wèn)題的原因所在***會(huì)有很多幫助。比如：保留時(shí)間的漂移是有色譜柱柱子老化引起的。而色譜柱柱子老化又不會(huì)引起保留時(shí)間的無(wú)規(guī)律波動(dòng)，其實(shí)，經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)。保留時(shí)間漂移的很多原因都是不同機(jī)理和性質(zhì)的色譜柱老化造成的，比如。（固定相流失）（色譜柱污染）等等

保留時(shí)間漂移的***常見(jiàn)的幾種原因：

一、液相色譜柱平衡

如果我們觀察到保留時(shí)間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相******平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的流動(dòng)相，但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑（如離子對(duì)試劑）則需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。

流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移。應(yīng)注意：水是很容易污染的流動(dòng)相成分。

二、固定相穩(wěn)定性

固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用，固定相也會(huì)慢慢水解。例如硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩(wěn)定性******。水解速度與流動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長(zhǎng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。

經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì)加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。

三、液相色譜柱污染

保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過(guò)濾器，它可以過(guò)濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。

污染源可以是流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過(guò)實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來(lái)源。

樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，***可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。避免色譜柱污染***簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。

四、流動(dòng)相組成

流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。

五、疏水坍塌

當(dāng)小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近****的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或******不保留的現(xiàn)象，這***是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動(dòng)相不浸潤(rùn)固定相表面而致。挽救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的流動(dòng)相浸潤(rùn)固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。液相色譜柱長(zhǎng)期儲(chǔ)存也會(huì)發(fā)生此現(xiàn)象。使用內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相色譜柱（如賽分色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如賽分色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌。

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