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高效液相色譜儀常見問題

閱讀：53發(fā)布時間：2025-3-25

本章節(jié)主要講解高效液相色譜儀關(guān)于色譜峰的一些問題和情況以及解決的辦法。

　　1、出現(xiàn)色譜峰齊肩或者分叉

　　1樣品體積太大。解決辦法：（用流動相配樣），樣品的體積（小于******峰的百分之15）

　　2樣品溶劑比較強(qiáng)。解決辦法：用比較弱的溶劑；

　　3色譜柱變踏或者短路。解決辦法：更換色譜柱,用腐蝕性比較低的條件；

　　4色譜柱柱內(nèi)燒結(jié)。解決辦法：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品；

　　5進(jìn)樣器損壞.解決辦法：更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子。

　?、?、色譜柱出現(xiàn)鬼峰

　　1進(jìn)樣閥出現(xiàn)殘余峰解決辦法。使用之后記得清洗進(jìn)樣閥和樣品

　　2樣品出現(xiàn)不明物質(zhì)，更換樣品

　　3柱未平衡--重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）；

　　4三（TFA）氧化--每天新配,用抗氧化劑；

　?、菟廴荆ǚ聪啵?-通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水。

　?、?、色譜峰出現(xiàn)拖尾情況

　?、偕V柱柱超載--降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相；

　　②色譜峰干擾--清潔樣品,調(diào)整流動相；

　?、酃枇u基作用--加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,純化樣品；

　?、苌V柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效--更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品；

　?、萆V柱塌陷或形成短路通道--更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；

　?、匏荔w積或色譜柱外體積過大--連接點降至******,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管；

　?、呱V柱效下降--用較低腐蝕條件,更換色譜柱,采用保護(hù)柱或者預(yù)裝柱。

　?、?、液相色譜峰出現(xiàn)重排情況

　　在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發(fā)生峰位的重排。

　　下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動相中換了強(qiáng)溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。

　　⑤、出現(xiàn)峰展寬

　?、贅悠敷w積過大--用流動相配樣,總的樣品體積小于******峰的15%；

　?、谠谶M(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展--進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散；

　　③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢--設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點；

　?、軝z測器時間常數(shù)過大--設(shè)定時間常數(shù)為感興趣******峰半寬的10%；

　?、萘鲃酉嗾扯冗^高--增加柱溫,采用低粘度流動相；

　?、迿z測池體積過大--用小體積池,卸下熱交換器；

　?、弑Ａ魰r間過長--等度洗脫時增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫；

　?、嘀怏w積過大--將連接管徑和連接管長度降至***小；

　?、針悠愤^載--進(jìn)小濃度小體積樣品。

　　6、出現(xiàn)倒峰

　　所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進(jìn)在此波長下沒有吸收或吸收低于流動相的溶液，在流動相中會出現(xiàn)洞穴，通過柱后出現(xiàn)倒峰。

　　7、出現(xiàn)“胖"峰和平頭峰

　　用比流動相強(qiáng)度大的大體積樣品進(jìn)樣，通常會損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖"峰和平頭峰。

　　應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A******用流動相溶解樣品進(jìn)樣。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進(jìn)樣，主要缺點是每次進(jìn)樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負(fù)峰，有時還波及到樣品峰。C需要時用強(qiáng)溶劑溶解進(jìn)樣。

　　8、前延峰的發(fā)生及處理

　　因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。在離子對色譜中，前延峰的另一個原因是用非流動相作樣品溶劑。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進(jìn)樣量不要太大，否則會導(dǎo)致前延峰或其它問題。在RP-HPLC中樣品溶液的強(qiáng)度大于流動相引起前延峰。增加流動相的強(qiáng)度，減少樣品溶液的強(qiáng)度，在離子對色譜中增加離子強(qiáng)度，可以克服前延峰的效應(yīng)。此外使用流動相溶解樣品是解決的***簡單實用的方法。

　　9、液相色譜峰變寬的原因

　　A、在使用過程中色譜柱本身退化，逐漸降低色譜柱柱效。

　　B、色譜柱外峰寬效應(yīng)。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說明新系統(tǒng)有很大的色譜柱外峰寬效應(yīng)

　　C、化學(xué)效應(yīng)，多數(shù)是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。

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