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成都摩爾科學(xué)儀器有限公司

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技術(shù)文章

高效液相色譜儀的使用方法

閱讀：113發(fā)布時(shí)間：2025-3-26

液相色譜儀器廠家眾多，產(chǎn)品也不同，各個(gè)廠家的儀器使用方法也不同，在你剛購買液相色譜儀的時(shí)候，廠家會有專門的培訓(xùn)使用方法和系統(tǒng)使用說明說。高效液相色譜儀和結(jié)構(gòu)儀器是很重要的發(fā)展方向，液相色譜里面的質(zhì)譜技術(shù)是每一家實(shí)驗(yàn)室工作人員都重視的地方，。比方要分析氨基酸農(nóng)藥等，液相色譜里面的紅外光譜是用來分析環(huán)境污染水份測試的一種方法。
液相色譜儀的使用方法：
內(nèi)容：
1 開機(jī)
1.1 打開電腦。
1.2 打開液相色譜各個(gè)模塊的電源。
1.3 雙擊桌面“儀器—聯(lián)機(jī)"，進(jìn)入聯(lián)機(jī)界面。
1.4 排氣：
1.4.1 手動(dòng)旋開泵處沖洗閥（逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)約1圈）。
1.4.2 右鍵單擊“泵"圖標(biāo)區(qū)域，選擇“方法…"選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)流速：5ml/min（一般為3－5ml/min），點(diǎn)擊“確定"。
1.4.3 右鍵單擊“泵" 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制…"選項(xiàng)，選中“ON"，點(diǎn)擊“確定"，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止，（一般為5分鐘），切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。
1.4.4 右鍵單擊“泵" 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…"選項(xiàng)，設(shè)流速：0ml/min，手動(dòng)旋緊沖洗閥。
1.4.5 右鍵單擊“泵"圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…"選項(xiàng)，按照方法要求選擇合適比例的流動(dòng)相，設(shè)流速：1.0ml/min。
1.4.6 同理右鍵單擊“柱溫箱"，“檢測器"圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…"選項(xiàng)，按照方法的要求設(shè)置溫度，波長，點(diǎn)擊“控制" 選項(xiàng)，“ON"打開柱溫箱和檢測器。
2 編輯方法
2.1 點(diǎn)擊“方法"－“編輯完整方法"開始編輯完整方法。
2.2 選中除“數(shù)據(jù)分析 "外的三項(xiàng)，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。
2.3 方法信息：在“方法注釋"中加入方法的信息（如：This is for test?。?。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。
2.4 泵參數(shù)設(shè)定：在“流速"處輸入流量，如1.0ml/min，停止時(shí)間：如10 min（該停止時(shí)間僅為做一個(gè)樣品需要的時(shí)間），按照要求選擇合適比例的流動(dòng)相配比，如乙腈：水＝75：25，A為水，B為乙腈，則設(shè)置B：75％即可。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。
2.5 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：選擇“洗針進(jìn)樣"----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。
2.6 柱溫箱參數(shù)設(shè)定：在“溫度"下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，如：40度。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。
2.7 UV檢測器參數(shù)設(shè)定：在“波長"下方的空白處輸入所需的檢測波長，如254nm。點(diǎn)擊確定。
2.8 在“ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 "中，選中“ 數(shù)據(jù)采集"，點(diǎn)擊“確定"。
2.9 從“方法"菜單，選中“方法另存為…"，輸入一方法名，如“測試"，點(diǎn)擊“確定。
3 單次采集
3.1 從“運(yùn)行控制"菜單中，選擇“樣品信息"選項(xiàng)，選擇合適的路徑，在“數(shù)據(jù)文件"中選擇 “前綴/計(jì)數(shù)器"，輸入樣品瓶的位置，點(diǎn)擊“確定"。
3.2 基線平穩(wěn)后約10分鐘，從“運(yùn)行控制"菜單中選擇“運(yùn)行方法"。
4 多次數(shù)據(jù)采集
4.1 按照步驟2 編輯完整方法。
4.2 點(diǎn)擊“序列"－“序列表"，輸入“樣品瓶"“樣品名稱"，“進(jìn)樣次數(shù)"，選擇合適的“做樣方法"
4.3 點(diǎn)擊“序列"－“序列參數(shù)"，選擇序列數(shù)據(jù)的保存路徑（序列會自動(dòng)生成以“序列名稱－時(shí)間"為名稱的文件夾保存數(shù)據(jù)），數(shù)據(jù)建議以選擇 “前綴/計(jì)數(shù)器"保存。
4.4 從“序列"菜單，選中“序列另存為…"，輸入一序列名，如“測試"，點(diǎn)擊“確定。
4.5 從“運(yùn)行控制"菜單中選擇“運(yùn)行序列"。
5 數(shù)據(jù)分析（脫機(jī)狀態(tài)使用）
5.1 雙擊“儀器 —脫機(jī)"圖標(biāo) 進(jìn)入的脫機(jī)畫面。
5.2 從“視圖"菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析"進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。
5.3 從“文件"菜單選擇“調(diào)用信號"，選中您的數(shù)據(jù)文件名。點(diǎn)擊“ 確定"，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。（如預(yù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)先打開濃度較低的標(biāo)樣圖譜。）
5.4 做譜圖優(yōu)化：從“圖形"菜單中選擇“信號選項(xiàng)"。從“范圍" 中選擇“滿量程" 或“自動(dòng)量程" 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程" 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定"。
6 積分：
6.1 從“積分"菜單中選擇“積分事件"選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度"，“峰寬"，“***小峰面積"，“***小峰高"。點(diǎn)擊，自動(dòng)加載積分參數(shù)。
6.2 點(diǎn)擊左邊“√"圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法并退出“積分事件"。
6.3 如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。
7 標(biāo)準(zhǔn)曲線
7.1 點(diǎn)擊“校正"－“校正設(shè)置"，輸入“含量單位"。
7.2 點(diǎn)擊“校正"－“新建校正表"，點(diǎn)擊確定。輸入“化合物名稱"和“含量"，點(diǎn)擊“確定"，按照提示刪除其他組分。
7.3 至此完成單級校正，如要增加校正級別，應(yīng)從“文件"菜單選擇“調(diào)用信號"，選中您的數(shù)據(jù)文件名（******個(gè)標(biāo)樣），點(diǎn)擊“校正"－“添加級別"，點(diǎn)擊確定，輸入“含量"，依次增加校正級別。
8 打印報(bào)告
8.1 從“報(bào)告"菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告"選項(xiàng)，點(diǎn)擊“定量結(jié)果"框中“定量"右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法"，其它選項(xiàng)不變，點(diǎn)擊“ 確定"。
8.2 從“報(bào)告"菜單中選擇“打印報(bào)告"，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報(bào)告" 底部的“打印"鈕。
8.3 點(diǎn)擊“文件"－“另存為"－“方法"，把數(shù)據(jù)分析方法保存，下次分析可直接在“文件"－“調(diào)用"－“方法"下，將該方法調(diào)出使用。（調(diào)用的方法中含有積分方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線方法和打印報(bào)告方法）
9 關(guān)機(jī)
9.1 關(guān)機(jī)前，先關(guān)紫外燈，用相應(yīng)的溶劑（甲醇或乙腈）充分沖洗系統(tǒng)大約30分鐘。（色譜柱***終應(yīng)保存在甲醇或乙腈中）
9.2 退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。
9.3 關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開關(guān)。
10 其它注意事項(xiàng)
10.1 當(dāng)樣品運(yùn)行時(shí)，切勿打開自動(dòng)進(jìn)樣器前遮蓋，否則進(jìn)樣過程停止。
10.2 系統(tǒng)發(fā)生漏液時(shí)，機(jī)器會檢測到并停止進(jìn)樣，狀態(tài)指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處，擦干漏液傳感器，單擊ON按鈕，系統(tǒng)重新初始化。
10.3 注意紫外燈使用壽命，切勿來回開關(guān)紫外燈。
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題***有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。

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