細(xì)胞凋亡檢測(cè)使用步驟
1. 調(diào)整待測(cè)細(xì)胞的濃度為5×105-1×106個(gè)/ml。 2. 取1ml細(xì)胞，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清。 3. 加入1ml預(yù)冷的PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清（對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用*消化，再用PBS洗滌）。 4. 重復(fù)步驟3兩次。 5. 將細(xì)胞重懸于200μl Binding Buffer。 6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15分鐘 或4℃反應(yīng)30 分鐘。 7. 加入300μl Binding Buffer，在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 8. 若用熒光顯微鏡檢測(cè)，將細(xì)胞混合液離心，取細(xì)胞沉淀涂片，再進(jìn)行觀察。
使用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)
為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請(qǐng)認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。 
1.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。 
2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì)，在保存與操作時(shí)請(qǐng)注意避光。 
3.Propidium iodide（PI）能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用。 
4.在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 5.PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。 
6.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。 
7.反應(yīng)完畢后請(qǐng)盡快檢測(cè)，因?yàn)榧?xì)細(xì)胞凋亡檢測(cè)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，反應(yīng)1小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開(kāi)始衰變。 
8.成功的檢測(cè)凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時(shí)PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時(shí)間等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對(duì)實(shí)驗(yàn)成功是非常必要的。
 L-乳酸脫氫酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    Lactic dehydrogenase(rabbit muscle)    含量:    BR，5000u/g
骨膠原酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    Collagenase    含量:    BR，2000-5000u/mg
*    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    Hyaluronidase    含量:    高純，20000U/mg
辣根過(guò)氧化物酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    POD    含量:    BR，2萬(wàn)u/mg
α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    α-Galactosidase preparation from green coffee beans    含量:    標(biāo)準(zhǔn)品，7萬(wàn)u/mg
乳糖酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    β-Galactosidase from Escherichia coli    含量:    BR，1200u/mg
L-*去氫酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱(chēng):    L-GLDH    含量:    BR，45000u/mg
細(xì)胞凋亡檢測(cè)