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蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA)250ul實(shí)驗(yàn)方法

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蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA)250ul實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA)250ul實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件:-20℃保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括*蛋白酶、半*酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶、金屬蛋白酶等。

此抑制劑混合物為100 倍濃縮DMSO 溶液,適用于從哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織中提取蛋白,直接加入任何組織類型和細(xì)胞的裂解產(chǎn)物中,均能有效抑制蛋白酶的活性,更高效的提取目的蛋白。

蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA)250ul實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
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景東山橙Melodinus khasianus Scandine 異黃酮,攀援山橙堿 24314-59-8 C21H22N2O3 ≥95%

三七皂苷R1ThrsqvqnscponinR120mg/支

遠(yuǎn)華蟾蜍精;遠(yuǎn)華蟾毒精 ocinobufagin 472-26-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定*100689-200401常溫,避光100mg

Poloxamer Liquid泊洛沙姆液標(biāo)準(zhǔn)品9003-11-61ml
16801-85-9 阿扎*A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg

桑色速;桑皇速Morin;Morin480-16-0;624022-01-3HPLC≥98%,20mg/支

Furowanin A 6-(3,4-二輕基本基)-2,3-二輕-4-輕基-2-(1-輕基-1-甲基乙基)-9-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-5H-呋喃并[3,2-G][1]本并-5-同 911004-72-3

Etidronic Acid Monohydrate羥基乙叉二膦酸標(biāo)準(zhǔn)品(HEDP)25211-86-31g羥基乙叉二膦酸標(biāo)準(zhǔn)品(HE
NA 硫 ICP 標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 100ml

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6α,16,18-Trixy7noxycleroda -3,13-dien-15,16-olide 6ALPHA,16,18-三輕基克羅-3,13-二烯-15,16-內(nèi)酯 1017233-48-5

左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品174607-68-2 30mg

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大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)免疫試劑盒 Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21A ELISA Kit

脯酸(PRO)含量測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 可見(jiàn)分光光度法

RatN-terminalpro-brainnatriureticpeptide,NT-proBNPELISA試劑盒大鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanHomocysteicacid,HcyELISA試劑盒人同型半*(Hcy)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISAKit人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠apelin 12(AP12)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat intercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒

HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancomplementcontrolprotein,CCPELISA試劑盒人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織B-RAF激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanpulmonaryactivationregulatedchemokine,PARCELISAKit人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人可替丁(Cotinine)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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