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更新時間:2017-07-10 12:14:22瀏覽次數(shù):311次
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核酸去除液5ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
核酸去除液5ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
NRG4 Protein Human 重組人 NRG4 蛋白
大鼠頜下腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
PIANP Others Human 人 C12orf53 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MCA38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 MCA38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS
少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化培養(yǎng)基OPCDM
PA319(人大腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1
CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CM-H050人胎盤羊膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
Colo320DM細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 胎兒骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,FBM細(xì)胞 人永生化淋巴細(xì)胞;CNLMG-B5537LC
FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
BCAM Others Human 人 BCAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CD59 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人牙齦成纖維細(xì)胞裂解物HGFL
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975
MHCC97-L細(xì)胞,人低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 小鼠白血病細(xì)胞,P388細(xì)胞 兔腎細(xì)胞;RK-13
MADB106(大鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-22110 Endothelial Cell GrowthMedium KIT, 內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml
大鼠轉(zhuǎn)錄因子P65(RELA)ELISA試劑盒 ,英文名: RELA ELISA Kit
人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA檢測試劑盒Humanadrenomedullin,ADMELISAKit 96T/48T
大鼠促?;鞍?/span>(ASP)免疫試劑盒 Rat acylation stimulating protein,ASP ELISA Kit
CLIAKitforTRELISAKit大鼠*受體規(guī)格:48T/96T
氫離子膜通道轉(zhuǎn)運功能(P型ATP酶)藍(lán)色熒光檢測試劑盒20次
ELISAKitsnRNP/Sm人抗小核糖核蛋白/Sm抗體規(guī)格:48T/96T
人脂蛋白a(Lp-a)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) ELISA Kit 大鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
HumanBladdertumorantigen,BTAELISAKit 人膀胱抗原(BTA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒*G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-10)活性熒光定量檢測試劑盒20次
Humanleukocyteexastase,HLEELISAKit人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
核酸去除液5ml使用說明書大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(NF-kBp65)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKB-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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