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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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*1ml免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
*1ml免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽)

大鼠腮腺細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

EGFR Others Rat 大鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

NCI-H23人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H23 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS

豬晶狀體上皮細(xì)胞PlEpiC

PATU8988(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 視網(wǎng)膜muller細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562

CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

C57BL/6小鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells

BE(2)C細(xì)胞,人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 乙型溶血性鏈球菌 人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1

Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人上皮細(xì)胞;MCF-10A
小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA)(5×105)

人牙齦成纖維細(xì)胞總RNAHGF tRNA

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);LA1-GFP 小鼠視網(wǎng)膜muller細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human

CPA1 Others Human 人 Carboxypeptidase-A1 / CPA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒 Human adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit

MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

VTGELISA試劑盒鯉魚卵黃蛋白原規(guī)格:96T/48T

HumanMatrixmetalloproteinase7,MMP-7ELISA試劑盒人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit人磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat tumor necrosis factor beta (TNF- beta) ELISA Kit 大鼠壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

HumanHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanimmunoglobulinheavychainvariableregion,IgHVELISA試劑盒*重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-12)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Humanleukocytecommonantigen,LCA/CD45ELISAKit人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*1ml免費(fèi)代測大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠核因子kb(NF-kb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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