很多朋友在買液相色譜之前都會有一些疑問。這種儀器是如何組成的？品牌之間有哪些區(qū)別嗎？答案是肯定的，但結(jié)果是一樣的原理。一套液相色譜系統(tǒng)大致分為五個(gè)部分：流動相預(yù)處理部分、輸注部分、進(jìn)樣部分、分離部分和檢測部分。液相色譜系統(tǒng)由儲液器、泵、注射器、色譜柱、檢測器和記錄器組成。液相色譜儀的主要系統(tǒng)分為進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。主要是了解這些系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)。
液相色譜儀的組成：
一、輸液系統(tǒng)
包括溶劑柜、真空脫氣器、溶劑混合器、高壓泵等，核心部分為泵；泵的功能是為流動相通過緊密填充的色譜柱提供足夠的驅(qū)動力。
洗脫方法也分為兩種：
(1)等體積洗脫：流動相組成在同一分析周期內(nèi)保持不變，適用于組分少、性質(zhì)差異小的樣品。
(2)梯度洗脫：在分離過程中，采用兩種(或兩種以上)極性不同的溶劑，按照一定的程序連續(xù)改變流動相的濃度比和極性的一種洗脫方式。它用于分析成分多、性質(zhì)差異大的復(fù)雜樣品。
二、樣品注入系統(tǒng)
分析樣品被有效地送到色譜柱進(jìn)行分離。一般有自動進(jìn)樣器和手動進(jìn)樣器，進(jìn)樣量應(yīng)不少于回路體積的5-10倍(至少3倍)。
三、儲液器
儲槽是儲存溶劑的裝置。儲液器中的溶劑必須非常純，儲液器的材料應(yīng)耐腐蝕且對溶劑呈惰性。一般可以使用1-2升的大容量玻璃瓶或者不銹鋼材質(zhì)的容器。儲液器應(yīng)配備溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進(jìn)入泵中。溶劑過濾器一般由耐腐蝕的鎳合金制成，孔徑一般為2 m。
四、分離系統(tǒng)
主色譜柱是一根填充有填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等。并且它們的尺寸(內(nèi)徑、長度)不同；柱填料主要包括硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)，填料的粒徑不同。
五、梯度洗脫
梯度洗脫是在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成來增加洗脫能力的方法。用梯度裝置將兩種或三種或四種溶劑按一定比例混合，進(jìn)行二元或三元或四元梯度洗脫。一般用低壓梯度洗脫，低壓梯度是通過低壓混合設(shè)計(jì)的。只需要一個(gè)高壓泵就可以在常壓下將兩種或兩種以上的溶劑按一定比例混合后由高壓泵輸出。梯度可以是線性的、指數(shù)的或階梯式的。
六、色譜柱
色譜柱是整個(gè)色譜系統(tǒng)的心臟，其質(zhì)量直接影響分離效果。一般來說，色譜柱通常由不銹鋼管制成，柱的內(nèi)壁必須光滑，否則內(nèi)壁的縱向溝槽和表面孔隙也會造成譜帶增寬。立柱接頭的體積要盡量小，立柱長度一般為10 cm ~25cm，內(nèi)徑為4 mm ~5mm。如果使用直徑為5m~10m的固定相顆粒，理論塔板可達(dá)5 104個(gè)/m，尺寸排阻柱的內(nèi)徑通常大于5mm，制備的柱會更大；為了減少溶劑的用量，可以使用內(nèi)徑為1mm，長度為30mm ~75mm的微徑柱。如果使用3m的顆粒，理論塔板數(shù)可達(dá)1 105個(gè)/m4.。
七、 檢測器
對檢測器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度和流量變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、差分檢測器等。差分檢測器是一種通用檢測器，理論上可以檢測幾乎所有的化合物。其原理是基于含有樣品的洗脫液和洗脫液之間的折光率差異。差分檢測器受壓力變化、溫度變化和流動脈沖影響較大，不適合梯度洗脫。
八、脫氣裝置
脫氣的目的是防止流動相從高壓柱中流出，釋放氣泡進(jìn)入檢測器，使噪音無法正常檢測。一般來說，氦氣泡通常用于驅(qū)除流動相中的溶解氣體。因?yàn)楹ぴ诟鞣N液體中的溶解度極低，所以需要用氯氣快速清洗溶劑幾分鐘，然后讓氦以很小的流量流過溶劑。
九、高壓泵
泵應(yīng)耐壓、耐腐蝕且密封良好。高壓泵主要用于輸送流動相，其壓力一般為幾兆帕到幾十兆帕。液體的粘度比氣體高100倍。同時(shí)，由于固定相顆粒極細(xì)，柱內(nèi)壓降大，為了保證一定的流速，流動相必須通過高壓強(qiáng)制通過柱子。高壓泵應(yīng)無脈動或最小脈動，以確保輸出流動相的恒定流速。同時(shí)，可以用脈動阻尼裝置消除脈動，使流動相的流量變化范圍不超過2%~3%。高壓泵主要分為三大類：恒壓泵、恒流泵和螺桿泵。
十、進(jìn)樣器
高壓進(jìn)樣閥廣泛應(yīng)用于液相色譜儀進(jìn)樣器，通過微量進(jìn)樣器將樣品注入樣品回路。所用的樣品環(huán)有不同的尺寸，可根據(jù)分析要求選擇。當(dāng)進(jìn)樣閥的手柄置于吸入位置時(shí)，流動相通過孔的通道直接流向色譜柱，樣品通過注射器從另一個(gè)位置進(jìn)入樣品環(huán)。如果樣品過多，將從出口孔排出。然后將手柄轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置，流動相會將樣品帶入色譜柱。
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