在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)步驟都環(huán)環(huán)相扣，一步有誤就全盤(pán)皆輸，所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們一定不能掉以輕心，一個(gè)細(xì)微的小細(xì)節(jié)你沒(méi)有注意到很可能就毀掉整個(gè)實(shí)驗(yàn)。上海勁馬不是危言聳聽(tīng)，就拿洗滌來(lái)說(shuō)吧，看似是一個(gè)zui簡(jiǎn)單的操作，但是在洗板的時(shí)候沒(méi)有洗干凈的話，會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以上海勁馬對(duì)在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中關(guān)于洗滌“*的地位”做一個(gè)詳細(xì)的介紹。

洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA試劑盒就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)?？梢哉f(shuō)在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起實(shí)驗(yàn)人員的高度重視，應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。
洗滌的方式手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過(guò)程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次（或按說(shuō)明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。

以上是上海勁馬為您總結(jié)的關(guān)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中洗滌的一些具體操作參數(shù) ，希望對(duì)您的實(shí)驗(yàn)有所幫助，如果在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中您有任何疑問(wèn)都可來(lái)電向我們咨詢，勁馬公司也提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。

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