有絲分裂激酶Aurora-A在多種癌癥中頻繁過表達(dá)，并參與腫瘤進(jìn)展及治療耐藥性的形成，但其在耐藥性中的具體作用機(jī)制尚不明確。2026年4月20日，免疫應(yīng)答與免疫治療全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（以下簡(jiǎn)稱實(shí)驗(yàn)室）楊振業(yè)教授團(tuán)隊(duì)在PNAS在線發(fā)表題為“Aurora-A drives sorafenib resistance by scaffolding stress granule assembly via phase separation”的研究論文。該研究發(fā)現(xiàn)，Aurora-A不依賴激酶活性，索拉非尼處理可誘導(dǎo)Aurora-A發(fā)生相分離充當(dāng)RNA結(jié)合支架，促進(jìn)應(yīng)激顆粒SG組裝—一種促進(jìn)癌細(xì)胞存活的無膜細(xì)胞器，讓癌細(xì)胞耐受索拉非尼；破壞其相分離可逆轉(zhuǎn)耐藥。藍(lán)景科信為該研究提供了Polysome profiling技術(shù)服務(wù)

一、研究背景與科學(xué)問題

1.Aurora-A：經(jīng)典有絲分裂激酶，腫瘤中高表達(dá)，與耐藥相關(guān)，但非催化/相分離介導(dǎo)耐藥機(jī)制不清。

2.索拉非尼：肝癌等一線靶向藥，易耐藥；可誘導(dǎo)應(yīng)激顆粒SG形成，幫助癌細(xì)胞存活 。

3.科學(xué)問題：Aurora-A是否通過相分離參與SG組裝、驅(qū)動(dòng)索拉非尼耐藥？

二、核心發(fā)現(xiàn)

(1) 索拉非尼特異性誘導(dǎo)Aurora-A相分離并進(jìn)入應(yīng)激顆粒SG

1.受試的藥物中，只有索拉非尼能誘導(dǎo)Aurora-A在細(xì)胞質(zhì)形成動(dòng)態(tài)液滴

2.液滴與G3BP1/TIA1共定位（SG標(biāo)志）

3.活細(xì)胞拍到：同步成核、融合、解散（典型相分離行為）

4.體外：Aurora-A+G3BP1+RNA形成混合液滴

5.肝癌細(xì)胞Hep3B/PLC/PRF/5同樣成立（SI S1D）

結(jié)論:索拉非尼特異性誘導(dǎo)Aurora-A發(fā)生LLPS，并被招募到應(yīng)激顆粒SG中。

(2) Aurora-A相分離驅(qū)動(dòng)SG組裝，而非被動(dòng)被SG招募

1.Aurora-A敲低→SG數(shù)量/面積顯著下降

2.不影響G3BP1/TIA1總量、不影響eIF2α磷酸化（上游信號(hào)）

3.體外：Aurora-A顯著增強(qiáng)G3BP1-RNA相分離

4.無G3BP1/2或CHX阻斷SG→Aurora-A不再凝聚

5.多聚核糖體圖譜分析：Aurora-A與G3BP1共定位在40S亞基（翻譯停滯位點(diǎn)）

結(jié)論:Aurora-A不是SG的乘客，而是驅(qū)動(dòng)SG組裝的核心支架；其相分離嚴(yán)格依賴SG形成。

(3)Aurora-A促SG不依賴激酶活性

1.SG內(nèi)Aurora-A無磷酸化激活

2.MLN8237、D274A都不影響相分離與SG定位

3.體外加ATP（激活激酶）→不改變G3BP1液滴

4.BuGZ（有絲分裂結(jié)合蛋白）不參與應(yīng)激條件下的相分離（SI S3E）

結(jié)論：Aurora-A在SG中的功能是激酶非依賴的支架作用，與經(jīng)典有絲分裂功能獨(dú)立。

(4)分子機(jī)制：IDR結(jié)合RNA，形成Aurora-A-RNA-G3BP1

1.只有IDR（1-128）能相分離、進(jìn)SG、促SG組裝

2.激酶域無效

3.Pull-down/Co-IP：互作必須加RNA

4.NMR：添加G3BP1：無位移→不直接結(jié)合；添加RNA（polyA/polyU）：大幅位移/峰消失→直接結(jié)合RNA

結(jié)論:Aurora-A不直接結(jié)合G3BP1，而是通過IDR直接結(jié)合RNA，以RNA為橋形成三元復(fù)合物。

(5)IDR中K/R正電荷是RNA結(jié)合與相分離的必需位點(diǎn)

1.單獨(dú)缺任一段都還能相分離

2.KRmut：?jiǎn)适喾蛛x、RNA結(jié)合、促SG能力

3.NMR：KRmut+RNA→無任何位移

4.細(xì)胞內(nèi)：KRmut不進(jìn)SG、不促SG

5.肝癌細(xì)胞重復(fù)驗(yàn)證（SI S5L/M）

結(jié)論:IDR的正電荷K/R殘基是結(jié)合RNA、驅(qū)動(dòng)相分離、組裝SG的絕對(duì)必需位點(diǎn)。

(6)Aurora-A相分離→SG→索拉非尼耐藥

1.有Aurora-A液滴的細(xì)胞存活更久

2.KRmut細(xì)胞：死亡率顯著更高

3.結(jié)晶紫：KRmut對(duì)索拉非尼更敏感

4.肝癌細(xì)胞同樣成立（SI S6B/C）

結(jié)論:Aurora-A通過相分離促進(jìn)SG形成，直接賦予癌細(xì)胞索拉非尼耐藥性。

(7)體內(nèi)驗(yàn)證：破壞相分離逆轉(zhuǎn)小鼠腫瘤耐藥

1.溶劑組：WT與KRmut腫瘤無差異

2.索拉非尼組：KRmut腫瘤顯著更小更輕

3.KRmut腫瘤中：Aurora-A相分離↓、SG組裝↓

4.eIF2α磷酸化、G3BP1/TIA1總量不變

結(jié)論：體內(nèi)Aurora-A相分離介導(dǎo)SG組裝，驅(qū)動(dòng)索拉非尼耐藥；破壞相分離可恢復(fù)藥敏。

三、小結(jié)

1.全文邏輯鏈

索拉非尼應(yīng)激→細(xì)胞翻譯停滯→Aurora-A通過IDR的K/R結(jié)合RNA→發(fā)生LLPS→作為支架穩(wěn)定G3BP1-RNA凝聚→SG高效組裝→癌細(xì)胞抗凋亡→索拉非尼耐藥；突變K/R破壞相分離 →SG受損→耐藥逆轉(zhuǎn)。

2.全文技術(shù)總覽

l       細(xì)胞：HeLa、Hep3B、PLC/PRF/5、293T

l       基因操作：shRNA敲低、CRISPR敲除、點(diǎn)突變/截短、穩(wěn)轉(zhuǎn)

l       成像：免疫熒光IF、活細(xì)胞延時(shí)成像、共定位分析

l       體外：蛋白純化、熒光標(biāo)記、LLPS體外重組

l       互作：Co-IP、His Pull-down、NMR (1H-1?N HSQC)

l       翻譯：多聚核糖體圖譜分析（Polysome profiling）

l       功能：SYTOX Green、結(jié)晶紫、裸鼠異種移植