ELISA酶聯(lián)免疫法是如今實(shí)驗(yàn)室zui為常見的檢測方法，在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)我們的首要當(dāng)然是確定實(shí)驗(yàn)類型，然后就是樣本收集，樣本收集好了我們就可以開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是關(guān)于ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作方法您是否做對了呢？跟隨上海勁馬一起來檢查一下您的實(shí)驗(yàn)步驟是否規(guī)范吧。
試劑準(zhǔn)備
在臨床實(shí)驗(yàn)室，對試劑準(zhǔn)備一般不太注意，通常的做法是，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。
加血清樣本及反應(yīng)試劑
在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。
溫育
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。
按照以上ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作就能知道當(dāng)您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不正確時(shí)，問題出在哪個(gè)步驟。當(dāng)然了，如果您的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)謹(jǐn)，操作規(guī)范，那么實(shí)驗(yàn)就會(huì)很成功。
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