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血清與血清上清液?不是全部等同的同一個物質(zhì)?,二者是血液樣本處理流程中前后關(guān)聯(lián)但成分存在明確差異的兩種液體,結(jié)合臨床檢驗、分子檢測的實際操作場景,詳細拆解如下:
一、不同檢測場景下的使用注意事項
常規(guī)生化、血常規(guī)、激素檢測場景:二者的核心可溶性小分子指標幾乎無差異,檢測結(jié)果偏差≤5%,可以互相替代使用,不會影響最終檢驗結(jié)果。
病原體核酸PCR、游離ctDNA檢測場景:必須使用經(jīng)過二次純化的血清上清液,避免原始血清中的細胞碎片、血紅蛋白雜質(zhì)引入PCR抑制劑,導致擴增效率下降、假陰性率升高。
外泌體、微小RNA提取場景:必須使用無任何顆粒雜質(zhì)的血清上清液,原始血清中的細胞碎片會直接污染外泌體提取體系,導致最終提取產(chǎn)物的純度全部不達標。
二、血清上清液的定義與成分特殊性
血清上清液是在已經(jīng)制備得到的原始血清基礎上,經(jīng)過二次高速離心、過濾等進一步純化操作后,得到的上層澄清液體,屬于原始血清的次級衍生樣本。
核心成分:原始血清中含有的細胞碎片、殘留血小板、大顆粒脂蛋白聚集體等不溶性雜質(zhì),已經(jīng)通過二次高速離心、0.22μm濾膜過濾被全部去除,僅保留全部溶解在液相中的小分子可溶性物質(zhì),整體澄清度遠高于原始血清。
制備方式:將第一次低速離心得到的原始血清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,12000rpm以上高速離心10~15分鐘,小心吸取最上層全部無沉淀的澄清液體,即為血清上清液,不包含離心管底部的微量沉淀組分。
三、血清的基礎定義與成分構(gòu)成
血清是血液離體后,在不加任何抗凝劑的條件下,自然靜置凝固后析出的全部淡黃色透明液體,是臨床檢驗中常用的基礎生物樣本之一。
核心成分:包含血液中所有未參與凝血過程的可溶性物質(zhì),包括白蛋白、球蛋白、血脂、葡萄糖、電解質(zhì)、游離核酸、細胞因子、激素等,同時也含有極少量未全部沉淀的血小板、細胞碎片和微量殘留血細胞。
制備方式:全血采集后放入無抗凝劑的促凝管,室溫靜置30~60分鐘讓血液全部凝固,再經(jīng)過低速離心得到的上層全部液體,整體成分是未經(jīng)過二次二次分離的完整血清體系。
四、二者的核心差異對比
對比維度 | 原始血清 | 血清上清液 |
制備流程 | 僅一次低速離心,血液凝固后直接析出 | 原始血清經(jīng)過二次高速離心/過濾純化 |
雜質(zhì)含量 | 含少量細胞碎片、血小板、大顆粒脂蛋白聚集體 | 所有不溶性顆粒雜質(zhì)被全部去除,澄清度高 |
適用場景 | 常規(guī)生化、免疫類檢測,允許少量雜質(zhì)存在 | 高靈敏度分子檢測、游離核酸提取、外泌體提取 |
下游檢測兼容性 | 部分高敏PCR實驗易出現(xiàn)雜質(zhì)干擾抑制 | 幾乎無雜質(zhì)干擾,擴增效率和提取回收率更高 |
體積占比 | 占全血體積的30%~40% | 僅占原始血清體積的80%~90%,棄去底部沉淀 |
通過以上多維度的對比可以明確,血清和血清上清液是同一份血液樣本不同處理階段的產(chǎn)物,核心可溶性成分高度相似,但后者經(jīng)過進一步純化去除了所有不溶性顆粒雜質(zhì),在高靈敏度分子檢測場景下不能直接互相替代。
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