氟蟲腈商品名為銳勁特，是一種高活性且應(yīng)用廣泛的苯基吡唑類殺蟲劑[1]，主要用于殺滅鱗翅目和直翅目害蟲以及在土壤中鞘翅目害蟲的幼蟲。溴螨酯又稱螨代治、溴螨特等，化學(xué)名稱為4，4′-二溴二苯乙醇酸異丙酯，是一種低毒廣譜殺螨劑，尤其在防治對有機磷殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性的害螨方面效果明顯[2]。噠螨靈是一種、廣譜的殺螨劑，對葉螨、全爪螨、小爪螨等食植性害螨均具有明顯的防治效果。這3種農(nóng)藥對不同種類的害螨或害蟲均有良好的防治作用，因此已廣泛應(yīng)用于茶葉、果樹及蔬菜等作物[3，4]。由于其存在殘效期較長及被不合理使用等情況，容易在茶葉中殘留從而威脅人體健康；且國外對進口中國茶葉中3種農(nóng)藥的要求越來越嚴格，使其成為影響中國茶葉出口的壁壘，因此，建立同時測定茶葉中氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈3種農(nóng)藥殘留量的方法非常有必要。
　　目前，有關(guān)氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈3種農(nóng)藥的檢測方法主要有氣相色譜法（GC）[5-7]、液相色譜法（LC）[8，9]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[10，11]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[12，13]及氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）[14，15]等。這些方法只能測定同種基質(zhì)中的1種或2種農(nóng)藥，而有關(guān)茶葉中這3種農(nóng)藥同時檢測的研究報道較少。本研究利用固相萃取小柱凈化結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用法測定，既有效避免色譜法測定中出現(xiàn)的假陽性，又能滿足多數(shù)檢測機構(gòu)的儀器配置要求。本方法具有操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好且回收率高等特點，對其他食品中氟蟲腈、溴螨酯及噠螨靈的檢測具有參考意義。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 儀器
　　Ajlent7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、自動進樣器（美國安捷倫科技有限公司）；T25高速均質(zhì)機、MS3渦旋混合器（德國IKA公司）；Milli-QA10超純水儀（美國Millipore公司）；CR22GⅢ臺式離心機（日本日立有限公司）；24N-EVAP112型氮吹濃縮儀（美國ORGANOMATION公司）。
　　1.1.2 試劑
　　氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈標準品（天津環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心）；石墨化炭黑/氨基混合型固相萃取柱（Carbon/NH2，500 mg/6 mL，美國SUPELCO公司）；乙腈和丙酮（色譜純，美國DIMA公司）；其余試劑均為市售分析純。
　　1.2 方法
　　1.2.1 色譜質(zhì)譜條件
　　色譜柱：HP-5MS色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣：高純氦氣，1.2 mL/min；進樣口溫度：220 ℃；色譜柱升溫程序：初始150 ℃，保持1 min；以20 ℃/min升至280 ℃，保持10 min。進樣量：1 μL；進樣方式：不分流進樣；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：160 ℃；GC-MS傳輸線溫度：280 ℃。EI電離源，電離電壓70 eV；選擇離子掃描監(jiān)測模式。其他參數(shù)見表1。
　　1.2.2 樣品提取
　　取紅茶、綠茶樣品各約200 g，分別放入粉碎機中磨碎成供分析樣品。稱取粉碎后的試樣2.00 g（至0.01 g）至50 mL塑料離心管中，加入2 mL水混勻，再加入10 mL乙腈渦旋混勻，15 000 r/min均質(zhì)勻漿提取1 min，加入3.0 gNaCl，再以3 000 r/min渦旋2 min，9 000 r/min離心6 min，吸取上清液5 mL至15 mL玻璃離心管中，40 ℃氮吹至1 mL左右，待凈化。
　　1.2.3 樣品凈化
　　固相萃取柱中加入5 mL乙腈/甲苯（3：1，V/V）預(yù)洗柱，當液面接近柱吸附層表面時，立即加入上述待凈化溶液，用50 mL塑料離心管收集流出液，用2 mL乙腈/甲苯（3：1，V/V）洗玻璃離心管后過柱，并重復(fù)2次，后用20 mL乙腈/甲苯（3：1，V/V）洗脫殘留的農(nóng)藥。將收集后的塑料離心管于40 ℃氮吹近干，用丙酮定容至1 mL，在混合器上混勻后，轉(zhuǎn)移至GC進樣瓶中，GC-MS基質(zhì)外標法測定。
　　1.2.4 標準溶液配制及標準曲線
　　標準溶液：氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈分別用丙酮配制成100 mg/L標準儲備液，于-18 ℃保存。將氟蟲腈儲備液用丙酮稀釋成5 mg/L，再依次稀釋成1.0、0.25、0.10、0.025、0.010 mg/L；溴螨酯和噠螨靈儲備液用丙酮稀釋成10 mg/L，再依次稀釋成2.0、0.50、0.20、0.050、0.020 mg/L。
　　基質(zhì)標準溶液：按樣品前處理方法將空白樣品（未有3種目標農(nóng)藥檢出的樣品）制成基質(zhì)溶液，用基質(zhì)溶液稀釋標準儲備液制成相應(yīng)濃度基質(zhì)標準溶液，臨用現(xiàn)配。GC-MS進樣1 μL測定，獲得3種農(nóng)藥溶劑標準曲線、決定系數(shù)及儀器檢出限。 1.2.5 添加回收率與精密度 稱取空白紅茶、綠茶樣品，分別添加高、中、低濃度水平的混合標準溶液，渦旋混勻后，靜置過一夜，按照1.2.2和1.2.3進行提取凈化，每個添加濃度水平重復(fù)3次；利用1.2.4建立的基質(zhì)標準曲線定量，計算添加回收率、相對標準偏差及方法檢出限。 2 結(jié)果與分析 2.1 提取溶劑的選擇 由于溴螨酯、氟蟲腈和噠螨靈均易溶解于丙酮，同時參考GB/T 23376-2009《茶葉中農(nóng)藥多殘留測定氣相色譜/質(zhì)譜法》[16]和GB/T 23204-2008《茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》[17]中的提取溶劑要求，本研究將預(yù)添加0.05 mg/kg 3種農(nóng)藥的茶葉樣品，分別使用乙腈、乙腈/二氯甲烷（1：1，V/V）、乙腈/丙酮（1：1，V/V）作為提取溶劑進行提取，提取過程按照1.2.2進行，為了避免氮吹過程引起的目標物損失，離心后直接取上清液至進樣瓶上機測定，得到提取溶液類型-回收率關(guān)系圖（n=3，圖1）。 從圖1可以看出，乙腈對紅茶、綠茶中3種目標物的提取回收率均在89.5 %-97.3 %，而乙腈/二氯甲烷（1：1，V/V）對紅茶中氟蟲腈的提取回收率只有79.1 %，乙腈/丙酮（1：1，V/V）對紅茶中溴螨酯和綠茶中噠螨靈的提取回收率分別為77.4%和78.9%。同時對3種提取溶劑下的加標提取液上機測定后發(fā)現(xiàn)，乙腈/丙酮（1：1，V/V）提取液中雜質(zhì)多，乙腈中較少且沒有對3種目標物造成影響，乙腈/二氯甲烷（1：1，V/V）中少。綜合考慮提取回收率及提取后雜質(zhì)干擾，故選用乙腈為提取溶劑。 2.2 線性方程與基質(zhì)效應(yīng) 在1.2.1條件下，對氟蟲腈1.0、0.25、0.10、0.025、0.010 mg/L，溴螨酯和噠螨靈2.0、0.50、0.20、0.050、0.020 mg/L的丙酮標準溶液進行測定；按照1.2.2和1.2.3處理紅茶、綠茶空白樣本，獲得空白基質(zhì)溶液，后依照1.2.4配置相應(yīng)系列的基質(zhì)標準溶液進行測定；以進樣溶液濃度（mg/L）為橫坐標x，定量離子的提取離子色譜峰峰高為縱坐標y，繪制標準曲線。在不同基質(zhì)下，0.010-1.0 mg/L和0.020-2.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，獲得的相關(guān)線性方程見表2，決定系數(shù)均>0.991 0，儀器檢出限氟蟲腈為0.002 mg/L，溴螨酯和噠螨靈為0.005 mg/L。 由表3可知GC-SIM-MS分析時，氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈在紅茶、綠茶基質(zhì)中表現(xiàn)出一定的基質(zhì)增強效應(yīng)，丙酮溶液標準進樣，3種農(nóng)藥響應(yīng)均較低，而當利用基質(zhì)標準溶液進樣時，能明顯增強3種農(nóng)藥的響應(yīng)，并且增強幅度為：綠茶>紅茶，這可能與綠茶在制作過程中保留了較多的天然物質(zhì)如茶多酚、咖fei堿、葉綠素及維生素，從而加快3種農(nóng)藥在進樣口活性位點上的吸附-解吸附速度有一定關(guān)系。因此，在實際檢測時，為保證結(jié)果準確，應(yīng)采用基質(zhì)標準進行定量分析（表3）。 2.3 回收率、精密度和定量限 在高、中、低3個添加濃度水平下，按照1.2.5進行添加回收試驗，不同樣品中氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈的回收率為80.8 %-111.2 %，相對標準偏差為1.9 %-10.9 %（表4）。根據(jù)實際添標回收試驗，終確定紅茶和綠茶中氟蟲腈定量限為0.005 mg/kg，溴螨酯和噠螨靈為0.01 mg/kg。 3 結(jié)論與討論 本試驗采用固相萃取凈化，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定，建立了紅茶、綠茶中氟蟲腈、溴螨酯和噠螨靈殘留量的同時檢測和確證方法。對其前處理條件進行考察，采用基質(zhì)匹配標準曲線外標法定量，保證了定量的準確性。本試驗結(jié)果表明，乙腈對3種農(nóng)藥的提取效果，石墨化炭黑/氨基固相萃取小柱能有效的去除色素、糖類及有機酸等雜質(zhì)的干擾，減少基質(zhì)對目標物的影響；該方法的線性、靈敏度、準確度和精密度均能滿足殘留分析的要求。