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小鼠尿白蛋白檢測試劑盒范圍可用于測定抗原及抗體。
這種測試方法需要三個必要試劑:
一、固相的抗原或抗體,即“免疫吸附劑”;
二、酶標記的抗原或抗體,即“酶聯(lián)物”;
三、酶反應的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可以設計不同的檢測方法。雙抗體夾心法的反應模式。用特異性抗原進行包被盒制備酶結(jié)合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗體。此法受檢標準品不需稀釋,可以直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常用本方法。間接法是檢測抗體原理是利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體。
1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的受檢血清,保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成分在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標抗抗體。可用酶標抗人IG以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IGG檢測IGG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體結(jié)合,從而間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量成正相關。
4)加底物顯色。間接法成功的關鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結(jié)果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性。特別注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質(zhì)。間接法中,抗原包被后一般用無關蛋白質(zhì)(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉固相上的空余間隙。另外,在檢測過程中標本需先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結(jié)果的判斷。
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